IGF-1對水牛植入前胚胎發(fā)育及凋亡的影響.pdf

1、本研究主要探討胰島素樣生長因子-1(IGF-1)對水牛體外受精(IVF)及體細(xì)胞核移植(SCNT)胚胎發(fā)育和凋亡的影響及其作用機(jī)制，為進(jìn)一步完善水牛胚胎體外培養(yǎng)體系及提高胚胎質(zhì)量提供一定的科學(xué)依據(jù)。
　　 本研究分為以下五個(gè)試驗(yàn)。試驗(yàn)1通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法研究IGF-1受體(IGF-1R)在植入前水牛IVF及SCNT胚胎中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，IGF-1R在水牛IVF及SCNT各時(shí)期胚胎中均有表達(dá)，但在胚胎分裂的早期(I

2、VF：2-cell；SCNT：2-8cell)表達(dá)量較高，與卵母細(xì)胞的表達(dá)量無顯著差異(P>0.05)，而后逐漸下降，到囊胚期達(dá)到最低。試驗(yàn)2主要探討培養(yǎng)液中添加IGF-1對水牛胚胎發(fā)育的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加不同濃度的IGF-1(0、5、10、50、100ng/mL)對水牛IVF胚胎的分裂率沒有顯著影響(P>0.05)，但添加50ng/mL IGF-1組胚胎的囊胚發(fā)育率顯著高于不添加IGF-1的對照組(35.12％vs22.97％，P<

3、0.05)；用添加50ng/mL IGF-1的培養(yǎng)液培養(yǎng)水牛體細(xì)胞核移植胚胎，與不添加IGF-1的對照組相比胚胎分裂率差異不顯著(P>0.05)，但囊胚率得到顯著提高(46.43％vs34.18％，P<0.05)。試驗(yàn)3研究IGF-1對水牛IVF及SCNT胚胎IGF-1R mRNA表達(dá)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，添加50ng/mL IGF-1培養(yǎng)的水牛IVF及SCNT囊胚IGF-1RmRNA的表達(dá)量與不添加IGF-1的對照組相比顯著升高(P<0.05

4、)。試驗(yàn)4用TUNEL方法檢測水牛IVF及SCNT囊胚細(xì)胞凋亡情況的結(jié)果顯示，添加50ng/mL IGF-1培養(yǎng)液培養(yǎng)的水牛IVF及SCNT胚胎其囊胚細(xì)胞數(shù)均顯著高于不添加IGF-1的對照組(P<0.05)，而且兩組的囊胚細(xì)胞凋亡率都顯著低于對照組(P<0.05)。試驗(yàn)5，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的檢測結(jié)果顯示，經(jīng)添加50ng/mL IGF-1培養(yǎng)液培養(yǎng)的水牛IVF及SCNT囊胚，促凋亡基因baxmRNA的表達(dá)量顯著低于對照組(P<0.05)