TaMlo3基因克隆與功能分析.pdf

1、該研究根據(jù)大麥、擬南芥等植物中Mlo基因的保守序列設(shè)計(jì)了多對(duì)引物,運(yùn)用RT-PCR技術(shù)成功地克隆了一個(gè)513bp的小麥Mlo基因cDNA片段（命名為T(mén)aMlo3,GenBank接受號(hào)為AF336105）.而后利用RACE技術(shù)成功的從小麥cDNA中得到該基因的3′片段,兩次克隆共得到1322bp的TaMlo基因片段,該片段已包含Mlo基因的主要功能區(qū)域,編碼440個(gè)氨基酸,其中包括5個(gè)跨膜區(qū)域、1個(gè)20個(gè)氨基酸的鈣調(diào)素結(jié)合位點(diǎn)、1個(gè)核定位

2、序列（KKKVR）以及多個(gè)磷酸化位點(diǎn).用TaMlo3基因3′的800bp片段做探針,對(duì)不同抗性品種麥類(lèi)作物及感病品種不同誘導(dǎo)時(shí)期的Mlo基因的表達(dá)情況做Northern雜交分析.結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗病品種中Mlo的表達(dá)豐度非常的低,而在感病品種中,其表達(dá)量在接種后6小時(shí)達(dá)到最低,以上結(jié)果表明Mlo的表達(dá)可能與抗性抑制相關(guān).另一方面,該研究采用膠體金標(biāo)記方法對(duì)MLO蛋白的上游結(jié)合因子-鈣調(diào)素在小麥與白粉病菌互作過(guò)程中表皮細(xì)胞中的分布模式進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)