無籽刺梨RksAGL基因克隆與功能分析.pdf

1、本研究以無籽刺梨（Rosa kweichonensisvar.sterilis）花芽為材料，采用同源克隆結合cDNA末端快速擴增技術（Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE）從無籽刺梨中克隆得到AGL基因的cDNA全長，命名為RksAGL。對該基因進行生物信息學和時空表達分析。構建RksAGL基因植物表達載體pSH-35S-RksAGL，通過根癌農桿菌介導遺傳轉化煙草。獲得研究結果如下：
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2、、通過RACE技術克隆RksAGL基因的cDNA，全長1089 bp，開放閱讀框長度為747 bp，編碼248個氨基酸的蛋白。
　　2、RksAGL蛋白分子量約為28.56 kDa，理論等電點為9.40，是親水性蛋白，無信號肽序列，RksAGL基因編碼蛋白質二級結構以α-螺旋為主，占56.05％；其次為無規(guī)則卷曲占29.44%；延伸鏈占10.89%；β-轉角占3.63%。分析RksAGL基因序列發(fā)現(xiàn)其編碼的蛋白含有MADS box

3、結構域和K box域，還有C類基因特有的AG motifⅠ和AG motifⅡ，屬于MADS-box蛋白的TypeⅡ類型。Blast比對結果顯示無籽刺梨RksAGL基因編碼的氨基酸序列與玫瑰 AGL基因編碼的氨基酸序列（AAD00025.1、BAA90744.1、BAA90746.1和BAA90745.1）一致性在99%以上，與草莓AGL基因編碼的氨基酸序列（AAD45814.1）一致性為91%，與煙草AGL基因編碼的氨基酸序列（AAA

4、17033.1）一致性為68%。通過分析可認為RksAGL基因是無籽刺梨的AGAMOUS（AG）基因，歸屬于C類基因euAG進化系的成員。
　　3、實時定量PCR分析表明RksAGL基因僅在雄蕊和心皮中表達，在萼片和花瓣中未檢測到該基因的表達信號，而且，RksAGL基因在心皮的表達量是雄蕊表達量的1.6倍。
　　4、在初始載體pSH737的基礎上，構建了RksAGL基因的雙子葉植物表達載體pSH-35S-RksAGL，并使用