銅對豬肝細胞CuZn-SOD酶活性及mRNA表達的影響.pdf

1、該試驗以初生1日齡健康軍牧1號仔豬為試驗動物,研究不同銅濃度對CuZn-SOD酶活性及mRNA表達的影響.實驗一利用24孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞,細胞培養(yǎng)液中添加10％牛血清,同時分別添加0、15.6、31.2、46.8、62.4、78、93.6μmol/LCu,觀察細胞形態(tài),測定細胞培養(yǎng)液中CuZn-SOD酶活性.結(jié)果顯示:各個試驗組的酶活性均顯著增加,62.4μmol/Lcu時酶的活性最高(P<0.05).實驗二利用RT-PCR方法測定

2、肝細胞CuZn-SODmRNA表達量.細胞培養(yǎng)液中添加10％小牛血清,同時分別添加0、31.2、62.4、93.6 μmol/LCu,利用Trizol法從肝細胞中提取總RNA,采用RT-PCR方法擴增出SODcDNA,與pGEM-T載體相連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109,通過PCR鑒定及測序分析,證明所擴增DNA片段為目的片段.PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,用β-actin作內(nèi)參,用凝膠成像分析儀檢測SODmRNA的相對表達量.結(jié)果顯示,SO

3、DcDNA序列與基因庫中的相一致,重合性達98.8％.細胞培養(yǎng)液中添加31.2、62.4、93.6μmol/LCu,肝細胞中SODmRNA的表達量均顯著高于對照組(p<0.05),以62.4μmol/LCu組效果最為明顯.從兩個實驗的結(jié)果我們可以推測,銅作為CuZn-SOD的活性中心,不僅可以直接提高SOD的酶活性,而且可以對其基因表達進行調(diào)控,提高轉(zhuǎn)錄水平,使SODmRNA表達量增加,為后期的翻譯提供了條件,這對機體的抗氧化功能有重要