骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向類纖維環(huán)細(xì)胞分化效應(yīng)的比較研究.pdf

1、目的:干細(xì)胞移植是治療椎間盤退變的新方向，本研究利用transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)比較共培養(yǎng)誘導(dǎo)后SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向類纖維環(huán)細(xì)胞的分化能力。
　　方法:將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分別與纖維環(huán)細(xì)胞作直接接觸共培養(yǎng)，在共培養(yǎng)0天、7天、14天、21天后檢測(cè)。利用掃描電鏡觀察共培養(yǎng)細(xì)胞間的直接接觸，共培養(yǎng)誘導(dǎo)后用免疫組化檢測(cè)干細(xì)胞Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原表達(dá)，利用阿利辛染色及DMMB比色法檢測(cè)干細(xì)胞氨基聚糖分

2、泌量。最后用qRT-PCR測(cè)定干細(xì)胞CollagenⅠ、CollagenⅡ、Aggrecan基因表達(dá)。
　　結(jié)果:阿利辛染色及免疫組化染色顯示兩種干細(xì)胞在共培養(yǎng)后均能分泌Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原及蛋白多糖多聚體等纖維環(huán)細(xì)胞功能蛋白，且共培養(yǎng)兩周后上述組織學(xué)染色顯示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌較多的Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原及蛋白多糖多聚體。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在共培養(yǎng)14天起出現(xiàn)CollagenⅠ、CollagenⅡ基因表達(dá)量顯著

3、提高，而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在共培養(yǎng)21天后出現(xiàn)CollagenⅠ、CollagenⅡ基因表達(dá)量顯著提高;對(duì)于Aggrecan基因表達(dá)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞從共培養(yǎng)7天起顯著提升，而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在共培養(yǎng)14天后Aggrecan基因表達(dá)顯著提升。另外從細(xì)胞形態(tài)上講，共培養(yǎng)誘導(dǎo)后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞由針尖樣轉(zhuǎn)變?yōu)槿切?，類似于纖維環(huán)細(xì)胞。
　　結(jié)論:本研究通過(guò)組織學(xué)染色及qRT-PCR等技術(shù)成功證實(shí)經(jīng)直接接觸共培養(yǎng)誘導(dǎo)后后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂