黃芩苷對小鼠胚胎干細胞分化成心肌樣細胞的影響的研究.pdf

1、目的：采用中藥黃芩苷（baicalin)改變體外培養(yǎng)的小鼠胚胎干細胞（embryonic stem cell-D3)mES-D3微環(huán)境，探討黃芩苷對mES-D3定向分化為心肌樣細胞的影響。
　　 方法：在無白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）存在的條件下，96孔板中體外培養(yǎng)mES-D3細胞8天，MTT法檢測不同濃度的黃芩苷對ES細胞增殖和活性的影響，篩選合適的濃度用于分化誘導。采用經(jīng)典的

2、“懸滴-懸浮-貼壁”三步法，用三種濃度的黃芩苷誘導ES細胞向心肌樣細胞分化，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)；在不同貼壁時間點計數(shù)跳動的EB（embryoid body）個數(shù)，計算跳動EB的百分率；免疫細胞化學方法檢測心肌肌小節(jié)特異性α-輔肌動蛋白（α-actinin）的表達；RT-PCR檢測心肌特異性α-肌球蛋白重鏈（α-MHC）的表達；用流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞分化比例。
　　 結(jié)果: MTT結(jié)果顯示，1μmol/L，10μmol/

3、L，102μmol/L，103μmol/L的黃芩苷顯著抑制了mES-D3細胞的增殖，在所選濃度中10-1μmo/L的黃芩苷對細胞增殖的影響最小。通過對分化EB形態(tài)的觀察，我們發(fā)現(xiàn)中藥誘導組EB個數(shù)較空白組少，EB大小較空白組小，但是流式細胞技術(shù)結(jié)果顯示1μmo/L黃芩苷組明顯提高了心肌樣細胞分化率。而且免疫細胞化學和RT-PCR分別檢測到α-actinin和α-MHC的表達。
　　 結(jié)論：高濃度的黃芩苷顯著了抑制mES-D3細胞