2，4-D和磺胺二甲基嘧啶殘留ELISA檢測(cè)試劑盒的研制.pdf

1、農(nóng)藥和獸藥的廣泛使用，可以給農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來效益，這也導(dǎo)致了藥物在農(nóng)產(chǎn)品和動(dòng)物源性食品中的殘留，最終對(duì)食品衛(wèi)生和人類健康造成危害。 國(guó)內(nèi)外已建立了很多理化方法檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品和動(dòng)物性食品中的藥物殘留，雖然有些方法比較靈敏準(zhǔn)確，但由于花費(fèi)大、時(shí)間長(zhǎng)、技術(shù)要求高等原因而不適合大批量樣品的篩選。作為一種快速、靈敏、特異的方法，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定正逐漸應(yīng)用于藥物的殘留檢測(cè)。本研究對(duì)未有免疫原性的2,4-D和SM2小分子的官能團(tuán)進(jìn)行了修飾改造

2、，制備出了2,4-D和SM2的免疫原，并利用這些免疫原分別制備出了多克隆抗體，進(jìn)行了抗體的效價(jià)、特異性等性能的鑒定，建立了2,4-D和SM2的ELISA系統(tǒng)測(cè)定方法，并制備出了ELISA檢測(cè)試劑盒。 1.為了解決2，4-D缺乏免疫原性問題，篩選出碳化二亞胺法和混合酸酐法兩種方法進(jìn)行對(duì)小分子2，4-D的改造與合成，制備出了具有免疫原性的2，4-D免疫原和檢測(cè)原，經(jīng)聚丙烯凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)鑒定，證實(shí)人工免疫原合成成功。通過常規(guī)

3、方法免疫新西蘭大白兔獲得了多克隆抗體，其效價(jià)高達(dá)160，000。 在國(guó)內(nèi)首次建立起間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)2，4-D的測(cè)定方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)限為50ng/mL，檢測(cè)范圍為50～2，000ng/mL。通過交叉反應(yīng)測(cè)定與2-甲基-4-氯丙酸、2，4-二氯苯氧丙酸和2-甲基-4-氯苯氧乙酸3種苯氧乙酸類藥物幾乎無交叉反應(yīng)。初步組裝了具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的2，4-D的ELISA快速檢測(cè)試劑盒，并通過精密度、回收率、保存期等試驗(yàn)對(duì)試劑盒各個(gè)指標(biāo)

4、進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果均達(dá)到了試劑盒的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。 2.為了制備針對(duì)SM2的多克隆抗體，用戊二醛法將小分子SM2偶聯(lián)到牛血清白蛋白(BSA)，制備出具有免疫原性的SM2復(fù)合抗原。免疫新西蘭大白兔獲得了理想的抗體，其效價(jià)為40，000。 建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)SM2的測(cè)定方法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)限為2ng/mL，檢測(cè)范圍為2～100ng/mL。通過交叉反應(yīng)測(cè)定與磺胺嘧啶(SD)、磺胺間二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺吡啶(SPY)、磺