氫溴酸東莨菪堿微乳透皮制劑的研究.pdf

1、微乳是一種新型的藥物載體,九十年代起才開始應用于藥學領(lǐng)域。它是由表面活性劑、助表面活性劑、油相和水相按照一定比例形成的熱力學和動力學穩(wěn)定、透明或半透明、各向同性的液。液分散體系。微乳不需外力做功,可自發(fā)形成。粒徑較小,一般10～100nm,粒徑較小使其具有較強的組織親和力,可使活性物質(zhì)的經(jīng)皮擴散速率增加,吸收明顯加快。由于其良好的性能,近年來,在經(jīng)皮給藥方面的應用逐漸成為研究的熱點。本課題采用微乳為給藥載體,氫溴酸東莨菪堿為模型藥,研究

2、氫溴酸東莨菪堿微乳的制備工藝及影響因素,并進行藥效學評價。 研究方法： 1.空白微乳理化性質(zhì)的考察 1.1在室溫(25±1)℃條件下,在平底玻璃試管中,將表面活性劑與助表面活性劑按照一定質(zhì)量比(Km為1:4,1:2,1:1,2:1,4:1)混合,用恒溫磁力攪拌器充分混合均勻,加入油相分別按照質(zhì)量比10:0,9:1,8:2,7:3,6:4,5:5,4:6,3:7,2:8,1:9混合均勻,再逐滴加入三蒸水。滴加過程中

3、,觀察體系由濁變清或由清變濁情況,記錄臨界點,確定微乳區(qū)界限。本研究采用聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL-35)、聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremophor RH-40)為待考察表面活性劑,乙醇、1,2-異丙醇、正丁醇為助表面活性劑,乙酸乙酯、油酸聚乙二醇甘油酯(Labrafil M 1944 CS)、十四酸異丙酯(isopropyl myristate,IPM)、油酸(oleic acid)等為油相,通過滴定法制備空白微乳,繪制擬

4、三元相圖,考察各組分及表面活性劑與助表面活性劑質(zhì)量比(Km)等因素在常溫(25℃)狀態(tài)下對微乳形成及形成區(qū)域面積的影響。 1.2在待考察的微乳組分的擬三元相圖微乳區(qū)域中選擇某微乳比例測定各組微乳粒徑、粘度,并考察其不同組分對粒徑、粘度的影響,結(jié)合擬三元相圖,選擇微乳區(qū)域較大,粒徑、粘度值適宜的微乳處方。 2.氫溴酸東莨菪堿微乳理化性質(zhì)的考察在上述所選擇微乳體系中,選擇不同Km比值(4:1、2:1)、不同油相含量(6％、1

5、0％)及水相含量(30％、45％、60％)制備氫溴酸東莨菪堿水包油型微乳,測定各微乳粒徑、粘度值,考察各組分含量變化對粒徑、粘度等理化性質(zhì)的影響。同時,考察系統(tǒng)不同藥物含量對粒徑、粘度值是否產(chǎn)生影響。 3.氫溴酸東莨菪堿微乳體外透皮實驗 3.1建立氫溴酸東莨菪堿含量測定方法建立以高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography,HPLC)測定氫溴酸東莨菪堿含量的方法。色譜條件如

6、下：色譜柱為DiamonsilC18色譜柱(450×4.6mm,粒徑5μm);流動相為0.005mol/L膦酸二氫鉀溶液(磷酸調(diào)pH至3.2)-甲醇-乙腈(V/V/V：75:15:10);流速：1.0ml/min;檢測波長：215nm;柱溫：室溫；檢測靈敏度：1AUFS;進樣量：20μl。并進行精密度、重復性、加樣回收率實驗。以濃度C(μg/ml)對峰面積(A)進行線性回歸,得到氫溴酸東莨菪堿標準曲線。 3.2 Franz擴散池

7、體外透皮吸收實驗利用水平Franz擴散池對上章所考察的各比例微乳進行體外透皮試驗。選用180～200克左右雄性SD大鼠腹部皮膚,剝離腹部皮膚,小心刮去皮下脂肪組織和粘連物,用生理鹽水清洗干凈,用濾紙拭干,直接使用。如果需要保存的話,應置于錫箔紙中,-20℃冰箱保存,不超過1周。將皮膚平整置于水平Franz擴散池結(jié)合部,角質(zhì)層面向供給池,真皮層面向接受池,在37±0.1℃恒溫水浴擴散池中加入微乳4ml,接受液為4ml生理鹽水,攪拌子轉(zhuǎn)速為

8、300r/min。分別于0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12h處取樣,每次從接受池中取樣0.5ml,同時補入37±0.1℃生理鹽水0.5ml。按照已建立的HPLC法測定接受池氫溴酸東莨菪堿含量,由標準曲線計算各點接受池中藥物濃度,繪制體外透皮釋放曲線,計算氫溴酸東莨菪堿滲透速率(Jss)及12小時累積滲透量(Q)。結(jié)合上章粒徑、粘度值優(yōu)化微乳處方,最終確定氫溴酸東莨菪堿微乳制劑處方。同時考察微乳中各組分含量(水相、油相、Km值等

9、)變化對滲透速率、累積滲透量的影響。 4.氫溴酸東莨菪堿微乳制劑的藥效學實驗 4.1以模擬暈船刺激后2min內(nèi)的排糞顆粒數(shù)為基礎(chǔ)指標,加上排尿、立毛、顫抖反應的評分,計算出暈反應指數(shù),以此作為評價藥物抗暈效果的主要指標。比較用藥前后暈反應指數(shù)的變化,暈反應指數(shù)越低,說明藥物抗暈效果越好。 4.2 32只雄性SD大鼠,體重180～200g,適應性飼養(yǎng)3天后,每天接受一小時模擬暈船刺激,連續(xù)3天。根據(jù)暈反應指數(shù),將3

10、2只大鼠隨機分為4組,每組8只,分別為空白對照組、口服氫溴酸東莨菪堿組、市售氫溴酸東莨菪堿貼劑組及自制氫溴酸東莨菪堿微乳制劑組。大鼠單籠飼養(yǎng),自由攝入飼料和水,動物房溫度保持在25℃左右。記錄每24小時大鼠體增數(shù)、進食量。以暈反應指數(shù)作為藥效評價主要指標。一周后,各組給予相應藥物后半小時接受連續(xù)3天模擬暈船刺激,并只于第一天給藥。記錄暈反應指數(shù)、24小時體增數(shù)、進食量。注意每天同一時間進行稱量,同一時間接受模擬暈船刺激。 實驗結(jié)

11、果： 1.空白微乳形成的影響因素 實驗結(jié)果顯示表面活性劑的HLB值、EO基數(shù)目、助表面活性劑的碳鏈長度、表面活性劑和助表面活性劑質(zhì)量比(Km)、油相的結(jié)構(gòu)對微乳的形成及形成區(qū)域面積大小均有影響。粒徑的大小與微乳區(qū)域面積大小相關(guān)性比較大,具有最大微乳區(qū)域面積的微乳體系一般具有最小的粒徑,而粘度主要與物質(zhì)本身性質(zhì)有關(guān)。以上結(jié)果表明,微乳載體宜以聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremophor RH-40)為表面活性劑、無水乙醇為助表面

12、活性劑,油酸聚乙二醇甘油酯(Labrafil M 1944 CS)為油相。 2.氫溴酸東莨菪堿微乳理化性質(zhì)的考察 粒徑、粘度值結(jié)果顯示微乳水相、油相含量升高,Km值減小均可使體系粒徑增加。由于水包油(O/W)型微乳內(nèi)相為油相,所以油相含量增加對微乳粒徑增大有顯著影響。油相含量增加,可降低系統(tǒng)的粘度。除此之外,Km(s/cos)減小,乙醇含量增加,也可降低系統(tǒng)粘度。而微乳中藥物含量的變化對微乳粘度、粒徑均無顯著影響。結(jié)果表

13、明,氫溴酸東莨菪堿微乳的粒徑、粘度值主要與水相、油相含量及Km值有關(guān),而與藥物含量無關(guān)。 3.氫溴酸東莨菪堿微乳體外透皮實驗 3.1氫溴酸東莨菪堿、微乳色譜圖顯示氫溴酸東莨菪堿出峰時間在6.295min,空白微乳各輔料對其測定無干擾,專屬性良好。氫溴酸東莨菪堿標準曲線為A=15866C+28150,r=0.9997。結(jié)果表明,氫溴酸東莨菪堿在10～120μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。重復性實驗RSD為0.21％；精密度實

14、驗低、中、高濃度24小時內(nèi)各時間點峰面積RSD分別為1.2％、0.6％、0.4％；平均回收率為99.93±0.24％,RSD為0.24％。以上結(jié)果均表明此測定方法簡便可行、重復性、精密度良好。 3.2 Franz擴散池體外透皮擴散實驗結(jié)果顯示：在一定范圍內(nèi)水相含量增加、油相含量增加及Km值減小均可以使微乳透皮吸收率升高。綜合上章對氫溴酸東莨菪堿微乳粒徑、粘度的考察,確定氫溴酸東莨菪堿微乳處方如下：乳化劑(CremophorRH-40+無

15、水乙醇,Km=2:1)30％,油相Labrafil 10％,三蒸水58.5％,氫溴酸東莨菪堿1.5％。 4.氫溴酸東莨菪堿微乳貼劑藥效實驗 各組暈反應指數(shù)實驗結(jié)果顯示,自制氫溴酸東莨菪堿微乳制劑組與空白組比較、口服氫溴酸東莨菪堿組相比較均具有統(tǒng)計學差異(P<0.01),雖然微乳制劑組暈反應指數(shù)比陽性對照組低,但兩者之間無顯著差異(P>0.05)。但比較兩組給藥后每日暈反應指數(shù),發(fā)現(xiàn)第二、三天自制氫溴酸東莨菪堿微乳制劑組暈