植物中生物堿類乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是以記憶損傷、認(rèn)知功能障礙、行為障礙和生活自理能力下降為特征的慢性神經(jīng)退行性疾病，是老年癡呆中最常見的疾病。對于AD的治療，乙酰膽堿酯酶抑制劑(actylcholinesterase inhibitor，AChEI)被認(rèn)為是最有效的藥物。天然植物藥用成分具有療效好，副作用小，作用面廣，適宜長期服用等優(yōu)點(diǎn)。為尋找天然AChEI單體成分，本課題對采自甘肅文縣和舟曲的22種植物的總生

2、物堿提取物進(jìn)行了乙酰膽堿酯酶(actylcholinesterase，AChE)抑制活性的篩選，并對中藥百部中生物堿類AChE抑制活性成分進(jìn)行了研究。
　　 本文對22種植物的總生物堿提取物進(jìn)行AChE抑制活性篩選，對于具有顯著AChE抑制活性的生物堿提取物，同時(shí)測定了它們對AChE的半數(shù)抑制濃度。結(jié)果顯示：彎柱唐松草(Thalictrum uncinulatum Franch.)、闊葉十大功勞(Mahnia bealei(Fo

3、rt.) Steam.)、蜆殼花椒(Zanthoxylum dissitum Hemsl.)、刺柄南星(Arisaema aspeiatum N.E.Brown)、一把傘南星(Arisaema erunescens(Wall.) Schott)、貓兒屎(Decaisnea insignis(Griff) Hook.f.et thoms)、虎耳草(Saxifragas tolonifera curt.)和西固鳳仙花(Impotiens n

4、otolopha Maxim.)的總生物堿提取物具有明顯的AChE抑制活性，其IC50值分別為2.3μg/mL-1、2.9μg·mL-1、3.5μg·mL-1、11.0μg·mL-1、16.9μg·mL-1、22.7μg·mL-1、25.3μg·mL-1和40.7μg·mL-1。這8種植物的總生物堿對AChE有較好的抑制活性，可進(jìn)一步跟蹤分離其中的活性成分。其他植物的總生物堿表現(xiàn)出較弱或無AChE抑制活性。
　　 本文還對中藥百

5、部中的生物堿類乙酰膽堿酯酶抑制活性成分進(jìn)行了研究。通過活性跟蹤分離方法，分離了7個(gè)生物堿，運(yùn)用1HNMR、13CNMR、2D-NMR、EI-MS等現(xiàn)代波譜技術(shù)鑒定了其中的5個(gè)，它們分別為斯替寧堿甲(1)、斯替寧堿乙(2)、百部新堿(3)、塊莖百部新堿(4)和斯替寧堿(5)。其中化合物1和2為新化合物。通過改良的Ellman法測定了它們的抗AChE活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物2和5兩個(gè)化合物為活性較好的天然AChEI，其IC50值分別為2.

6、1±0.2μM和19.8±2.5μM。動力學(xué)研究表明化合物2是AChE的可逆競爭性抑制劑。為了明確活性化合物抑制AChE的分子機(jī)理，對其進(jìn)行了三維分子模擬實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)表明，化合物2與乙酰膽堿酯酶內(nèi)部的Trp84有相互作用，同時(shí)化合物2的內(nèi)酯環(huán)上的氧和Tyr130的羥基形成了一條氫鍵，其結(jié)合模式與石杉堿甲類似。研究結(jié)果表明內(nèi)酯環(huán)上的氧對化合物2的強(qiáng)AChE抑制活性是至關(guān)重要的。此外，在分子對接研究中計(jì)算得到的化合物結(jié)合自由能與實(shí)驗(yàn)得到的抑制