右美托咪定靜脈注射對(duì)大鼠急性疼痛行為及大腦皮質(zhì)GIRK1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：創(chuàng)傷后疼痛刺激作用于傷害性感受性受體，激活離子通道，增強(qiáng)傷害感受器敏感性和興奮性，產(chǎn)生疼痛的外周敏化及中樞敏化，其機(jī)制復(fù)雜且至今尚未明晰。在細(xì)胞損傷或炎癥狀態(tài)下，細(xì)胞因子通過(guò)相應(yīng)的離子通道、受體作用于外周傷害性感受器，使傷害性感受器興奮性及敏感性發(fā)生改變而產(chǎn)生外周痛覺(jué)敏化。而在外周敏化及持續(xù)傷害性刺激下，通過(guò)激活更多的細(xì)胞因子及基因表達(dá)等多種機(jī)制導(dǎo)致脊髓背角和大腦高級(jí)中樞產(chǎn)生中樞敏化。在對(duì)阿片類受體的研究中一個(gè)離子通道引起了人們的

2、注意，它就是G蛋白偶聯(lián)的內(nèi)向整流型鉀離子通道（GIRKs）。GIRK有5個(gè)亞基(GIRK1–5)，是內(nèi)向整流鉀通道家族的一個(gè)成員，能夠與G蛋白的βγ亞基直接相互作用而被激活。眾多資料表明，GIRK通道在調(diào)節(jié)靜息電位、調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性和神經(jīng)遞質(zhì)釋放中起重要作用，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中可與多種受體相耦聯(lián)，使細(xì)胞膜超級(jí)化，抑制神經(jīng)元沖動(dòng)的發(fā)放，從而減弱疼痛信號(hào)的傳導(dǎo)。傷害性刺激導(dǎo)致急性疼痛的機(jī)制與鉀離子通道相關(guān)，其保護(hù)性反射的形成與G蛋白耦聯(lián)內(nèi)向整

3、流性鉀通道（GIRK）蛋白相關(guān)。在痛覺(jué)傳遞的上行傳導(dǎo)系統(tǒng)和下行抑制系統(tǒng)各重要位點(diǎn)都存在GIRK通道的表達(dá)，并可通過(guò)多種受體來(lái)激活GIRK通道，足可證明GIRK通道在疼痛信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。右美托咪定是一種高選擇性α2腎上腺素能受體激動(dòng)劑，已證實(shí)其具有鎮(zhèn)痛作用，但是其對(duì)于急性創(chuàng)傷性疼痛形成及持續(xù)過(guò)程中大腦皮質(zhì)GIRK的表達(dá)及作用如何，目前知之甚少。故此，本研究擬建立大鼠切口痛模型，通過(guò)預(yù)先靜脈注射α2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑右美托咪定（D

4、exmedetomidine，DEX），對(duì)大鼠進(jìn)行機(jī)械痛敏測(cè)試觀察其對(duì)切口痛大鼠術(shù)后疼痛行為的影響；運(yùn)用免疫熒光雙標(biāo)、western blot等方法觀察其對(duì)大腦皮質(zhì) GIRK1蛋白表達(dá)的影響，評(píng)價(jià)右美托咪定靜脈注射對(duì)減輕大鼠術(shù)后痛覺(jué)過(guò)敏形成的作用，并探討其可能鎮(zhèn)痛機(jī)制，為臨床研究及應(yīng)用提供理論參考。
　　方法：采用大鼠切口痛模型。健康成年雄性 SD大鼠72只，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其分為4組（n=18）：對(duì)照組（C組，不作任何處理)

5、、安慰劑組（P組，先靜脈注射生理鹽水后行左后足切開(kāi)手術(shù))、右美托咪定低劑量組（L組，先靜脈注射右美托咪定5 ug/ kg后行左后足切開(kāi)手術(shù))和右美托咪定高劑量組（H組，先靜脈注射右美托咪定10 ug/ kg后行左后足切開(kāi)手術(shù))。于注射或術(shù)后0.5h、1h、2h、4h、6h和24h時(shí)采用von frey細(xì)絲法測(cè)定大鼠左后足機(jī)械痛閾的改變。于注射或術(shù)后2h、4h每組取6只大鼠處死后取腦組織，分別采用免疫熒光染色法和Western blot法

6、檢測(cè)大鼠大腦皮質(zhì)GIRK1蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：⑴機(jī)械痛閾的變化對(duì)照組在各觀察時(shí)間點(diǎn)的機(jī)械痛閾差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。術(shù)前各組機(jī)械痛閾差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。P組術(shù)后0.5h、1h、2h、4h、6h、24h等觀察時(shí)間點(diǎn)的機(jī)械痛閾較術(shù)前均明顯下降，提示大鼠切口痛模型成功。與P組比較，L組、H組術(shù)后0.5h、1h、2h、4h的機(jī)械痛閾降低幅度明顯少于P組（P<0.05），術(shù)后6、24h與P組比較機(jī)械痛閾降低幅

7、度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后機(jī)械痛閾值L組與H組比較降低幅度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑵大腦皮質(zhì)GIRK1蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與C組比較，P組、L組和H組大腦皮質(zhì)GIRK1蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加(P<0.05)。與P組比較，預(yù)先靜脈注射右美托咪定組（L組和H組）大腦皮質(zhì)的GIRK1蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯增加(P<0.01)，但L組與H組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。⑶大腦皮質(zhì)GIRK1蛋白的表達(dá)水平與C組比

8、較，P組 GIRK1蛋白表達(dá)輕度增加，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)， L組和H組的GIRK1蛋白表達(dá)均較 C組明顯增加(P<0.05)。與P組比較，L組、H組術(shù)后2h、4h時(shí)大腦皮質(zhì) GIRK1蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，但 L組與H組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組大鼠大腦皮質(zhì)GIRK1表達(dá)量在2h與4h時(shí)的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：①右美托咪定預(yù)先靜脈注射能提高切口痛模型大鼠的機(jī)械痛