美洲黑石斑魚(Centropristis striata)“突眼”癥的病原菌分離鑒定和組織病理學研究.pdf

1、近年來，養(yǎng)殖中美洲黑石斑魚的“突眼”病癥嚴重影響著其苗種繁育工作，給其養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成了巨額經(jīng)濟損失。本文在探究引發(fā)美洲黑石斑魚(C. striata)患“突眼”癥的相關(guān)病原和其病理學影響中：運用了生理生化和分子生物學、測酶活、顯微病理學、超微病理學等相關(guān)研究方法。研究結(jié)果如下：
　　1．美洲黑石斑魚“突眼”癥病原菌的分離鑒定：美洲黑石斑魚的“突眼”癥狀表現(xiàn)為：眼球白濁、充血、異常增生。從眼球病灶部位分離純化得到一株優(yōu)勢菌，在 TCB

2、S培養(yǎng)基上生長迅速，菌落中部隆起、黃色，有黏性，桿狀菌，端生單鞭毛，屬于革蘭氏陰性菌，定名為 CJG01。人工感染實驗證實：其對美洲黑石斑魚有較強的致病性，可引起幼魚眼球突出、脫落。解剖感染組的幼魚發(fā)現(xiàn)：患病幼魚的肝臟、腎臟紅腫、脾臟腫大，腸道內(nèi)有淡黃色液體。其半致死濃度 LD50為2.67×105 CFU/ml。API20NE快速鑒定及相關(guān)生理生化實驗結(jié)果表明：菌株CJG01的生長溫度為28-37℃，最適溫度為28℃，在含鹽量0-5％

3、之間的TSB培養(yǎng)基可生長，對弧菌抑制劑O/129敏感，氧化酶反應陽性，鳥氨酸脫羧酶反應陽性，V-P反應陰性，可同化甘露醇、麥芽糖、蘋果酸，不能同化葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、癸酸、已二酸、檸檬酸、苯乙酸等，菌株CJG01的生理生化特性與哈維氏弧菌一致。對病原菌的16SrDNA序列對比分析及系統(tǒng)進化樹分析表明，菌株CJG01與哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)序列同源性最高，達99%。藥敏實驗證實，該菌株對氨芐西林、頭孢氨芐、頭孢拉

4、定、諾氟沙星、青霉素、阿奇霉素、多粘菌素B，等8種藥物不敏感，對頭孢唑林、恩諾沙星、鏈霉素、紅霉素、克拉霉素，等4種藥物中度敏感，對抗生素頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢他啶、氧氟沙星、洛美沙星、氟羅沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素、新生霉素、新霉素、慶大霉素、卡那霉素、呋喃唑酮、利福平、四環(huán)素、米諾環(huán)素，等16種藥物敏感。
　　2．哈維氏弧菌CJG01病原株對美洲黑石斑魚血清生化指標的影響：與健康黑石斑魚相比，患病幼魚血清的總蛋白、白蛋白、甘油三

5、酯、總膽固醇、尿素氮的含量顯著降低，肌酐含量顯著增加，球蛋白的含量沒有顯著性差異；患病幼魚血清的乳酸脫氫酶活性的顯著增強，谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、溶菌酶的酶活性均顯著增強；患病幼魚血清的K+含量的顯著降低，Cl-含量顯著增加，Na+、Ca2+的含量沒有顯著性差異。這表明患“突眼”癥的美洲黑石斑魚的，肌肉、肝臟、腎臟等組織器官損傷嚴重，肝功能、腎功能異常。
　　3．哈維氏弧菌CJG01病原株對美洲黑石斑魚的顯微病理學影響

6、：患病幼魚的眼球腫脹，含有囊狀物，晶狀體部位含有凝血塊；肌纖維損傷壞死；心臟肌節(jié)模糊不清，紅細胞增多；肝中央靜脈擴張充血，肝細胞空泡變性，部分肝細胞核溶解、消失，大量的淋巴細胞、單核細胞等炎性細胞浸潤于肝細胞間質(zhì)；脾臟組織壞死，紅細胞破裂，脾臟充血，淋巴細胞增多；部分黏膜細胞脫落、壞死，胃底腺細胞排列疏松，胃底腺細胞空泡變性；大量炎性細胞浸潤于腸道黏膜層、黏膜下層，腸絨毛壞死；腎間質(zhì)淤血，大量紅細胞浸潤，腎小球毛細血管充血，腎小管管壁細

7、胞空泡變性、壞死，細胞核溶解、消失；鰓組織的病理變化不顯著。
　　4．哈維氏弧菌CJG01病原株對美洲黑石斑魚的超微病理學影響：患病幼魚的神經(jīng)突觸間質(zhì)充血，角膜的成纖維細胞壞死，膠原蛋白溶解。肌原纖維超微結(jié)構(gòu)， H帶模糊，M線模糊，肌原纖維斷裂，線粒體數(shù)量減少，部分線粒體解體。心肌纖維的H帶不清楚，M線不清楚，I帶不清楚，Z線不清楚，肌原纖維斷裂。肝細胞腫大、變形，一些肝細胞核被擠壓，偏離細胞中心。細胞核膜界限模糊，胞質(zhì)內(nèi)的線粒體

8、數(shù)量含量降低，部分線粒體解體。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)斷裂，空泡化嚴重，脂滴充滿整個肝細胞質(zhì)，細胞器溶解、彌散于細胞核周圍，溶酶體增多，部分肝臟細胞壞死、凋亡。脾臟組織的淋巴細淋巴細胞數(shù)量減少，淋巴細胞溶解死亡，細胞質(zhì)細胞器崩解，核膜破壞?；疾∮佐~胃組織的細胞界限模糊，核膜破壞，細胞核濃縮，細胞器溶解。腸上皮細胞細胞界限模糊，細胞空泡化嚴重。腎上皮細胞部分壞死，細胞核溶解，同時細胞內(nèi)溶酶體含量增多，幼魚第一近曲小管，內(nèi)皮細胞壞死，細胞界限模糊，絨毛脫