構建和表達抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶的融合蛋白.pdf

1、單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）分為單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和單純皰疹病毒Ⅱ型(HSV-2)兩種類型，可以感染皮膚、黏膜以及多種器官。絕大多數生殖器皰疹（genital herpes，GH）是由HSV-2感染引起，但由HSV-1感染引起的GH比例在增加。HSV-2感染目前是不可治愈的，主要通過性接觸水平傳播和母嬰垂直傳播，傳染性極強且會反復發(fā)作，皰疹發(fā)作產生的潰瘍是生殖器潰瘍的主要病因之一，流行病學

2、證據表明HSV-2感染與宮頸癌和人類免疫缺陷病毒(HIV)感染都有密切的關系。HSV-2在人群中有著很高的感染率和發(fā)病率，世界衛(wèi)生組織發(fā)布的調查數據顯示2003年全球15歲至49歲年齡段人群中，HSV-2感染率約為16.2％，發(fā)病率約為0.7％，并且都有不斷上升的趨勢。因此，建立一種簡便、快速、低成本的HSV-2初篩方法，對GH的輔助診斷和控制傳播具有重要的意義。
　　為探索本實驗室前期篩選到的特異性抗HSV-2糖蛋白B的單鏈抗體

3、在GH診斷中的實用價值，本研究將該單鏈抗體基因克隆入原核表達載體pLac-duet-1-AKP中構建了抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶的融合表達載體pLac-H3-AKP，并轉入大腸桿菌BL21(DE3)獲得表達，經IPTG誘導后SDS-PAGE顯示在破菌沉淀中有符合預期大小的約75kD大小的新生蛋白帶。將包涵體裂解后用鎳離子螯合層析純化變性的融合蛋白，并初步探索出該融合蛋白的最佳復性條件:復性緩沖液（50mmol/LTris-HCl，