廣藿香內生真菌多樣性及其在青枯病生物防治中的作用.pdf

1、目的：廣藿香[Pogostemon cablin(Blanco) Benth]具芳香化濕、和胃止嘔、祛暑解表的功效，是廣東道地藥材，著名的“十大南藥”之一，目前國內外對廣藿香的需求量極大。而由青枯菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的青枯病是廣藿香種植過程中危害最為嚴重的系統(tǒng)性病害，嚴重威脅廣藿香產(chǎn)業(yè)的生存與發(fā)展。因此，尋找新的安全有效的青枯病防治方法對于推廣廣藿香的種植、解決廣藿香資源緊缺、發(fā)展廣藿香產(chǎn)業(yè)具有重要

2、的意義。植物內生真菌蘊含的活性物質資源十分豐富，已成篩選新化合物和新藥的重要資源庫，此外內生真菌與宿主植物在漫長的進化過程中已建立密切的聯(lián)系，并能通過多種機制提高植物的抗病害能力，因而其在植物病害生物防治中也顯示出良好的應用前景。目前對廣藿香內生真菌的生物多樣性缺乏全面的認識，關于其在廣藿香青枯病防治中的潛在作用也尚未涉及。本論文旨在系統(tǒng)分析廣藿香內生真菌的類群結構及多樣性，并從中篩選出對廣藿香青枯病具有生防潛力的活性菌株，為全面挖掘廣

3、藿香內生真菌的藥用資源以及構建“內生真菌-廣藿香”青枯病生防系統(tǒng)提供前期基礎。
　　方法：
　　1.傳統(tǒng)培養(yǎng)法分析廣藿香可培養(yǎng)內生真菌的多樣性
　　采用組織塊分離法從廣藿香健康植株的根、莖、葉中分離內生真菌，結合形態(tài)學和基于rDNA-ITS序列分析鑒定方法分析廣藿香不同部位可培養(yǎng)內生真菌的類群結構及多樣性。
　　2.高通量測序方法全面分析廣藿香內生真菌的多樣性
　　分別提取廣藿香根、莖、葉樣品的總DNA，用

4、ITS5-1737F, ITS2-2043R引物對擴增真菌ITS區(qū)序列，Illumina Miseq高通量測序后分析比較廣藿香不同部位內生真菌的類群分布和多樣性。
　　3.篩選對廣藿香青枯病具有生防潛力的內生真菌
　　通過雙層平板拮抗試驗分析廣藿香內生真菌對青枯菌的體外拮抗活性；進一步通過盆栽試驗分析驗證活性菌株對廣藿香青枯病的生防效果。
　　結果：
　　1.從廣藿香中共分離獲得313株內生真菌，隸屬于30個屬，

5、其中鏈格孢屬(占28.75％)、擬莖點霉屬(占23.00%)和炭疽菌屬(11.82%)為優(yōu)勢類群，此外還分離到炭皮菌屬、彎孢聚殼屬、Gibellulopsis、新薩托菌屬、葡萄座腔菌屬、籃狀菌屬等較為少見的類群。莖、葉內生真菌的定殖率和分離率明顯高于根，而根部多樣性指數(shù)為2.643，要高于莖(2.002)和葉(1.974)。
　　2.經(jīng)過高通量測序后，廣藿香3個部位共獲得41188條有效序列，1305個OTUs分類，檢測到子囊菌門

6、和擔子菌門2個門類，其中根的優(yōu)勢菌屬為阿太菌屬(11.13%)和漆斑菌屬(10.19%)，莖的優(yōu)勢菌屬為曲霉屬(5.58%)，葉的優(yōu)勢菌屬為曲霉屬(0.64%)。廣藿香莖部內生真菌的物種豐度和總多樣性菌最高，根部次之，葉部最低。
　　3.從分離到的內生真菌中篩選到16株對青枯菌有抑制活性的菌株，其中菌株GHXR07、GHXR27、GHXR29的體外抑菌效果較為顯著，分別被鑒定為Talaromyces sp.、Myrothecium