雌激素受體相關(guān)受體α、γ與雌激素受體在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達.pdf

1、目的和意義：
　　 子宮內(nèi)膜癌作為女性生殖道最常見三大惡性腫瘤之一,約占女性生殖道癌瘤的20％-30％,而且近年來其發(fā)病率有上升趨勢。子宮內(nèi)膜樣腺癌占子宮內(nèi)膜癌的3/4,其發(fā)病因為一直是人們研究的熱點,現(xiàn)在認為其主要因為為持續(xù)、長期、異常的雌激素的刺激,和/或缺乏孕激素的拮抗。人體內(nèi)的雌激素來源廣泛,主要來源于卵巢、胎盤,絕經(jīng)后婦女主要來源于腎上腺。雌激素在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起了重要的作用。因此,研究雌激素的作用機制

2、對明確子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病機制有著重要的意義。
　　 經(jīng)典的雌激素信號傳導(dǎo)由雌激素受體(estrogen receptor,ER)與配體結(jié)合并誘導(dǎo)ER.的構(gòu)象改變開始,ER解離熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)形成E-ER復(fù)合物,可以直接與雌激素反應(yīng)單元序列(estrogen relative element,ERE)結(jié)合,也可間接地通過蛋白質(zhì)間相互作用與在啟動子結(jié)合,從而增高或降低mRNA的水平和相關(guān)蛋白

3、的產(chǎn)生,進而引起各自相應(yīng)的生理反應(yīng)。
　　 核受體超家族(nuclear receptor superfamily,NRs)是一類成員眾多的超家族轉(zhuǎn)錄因子,其中包括經(jīng)典的配體依賴性受體和數(shù)目眾多的孤核受體。雌激素受體相關(guān)受體(estrogen receptor-related receptor,ERR)和ERs同屬于第3型核受體家族。目前,已發(fā)現(xiàn)ER有兩種亞型,即ERα和ERβ,ERRs有三種亞型,即ERRα、ERRβ和ERRγ

4、。ERα早在上世紀(jì)八十年代即被發(fā)現(xiàn),并被認為是唯一的ER,直至十年后ERβ才被發(fā)現(xiàn)。ERRα、ERRβ最初是利用ERα受體的DBD區(qū)作為探針采用低嚴謹雜交技術(shù)從腎cDNA文庫中篩選出來,而ERRγ則于1999年利用GRIP1蛋白為誘餌通過酵母菌雙雜交技術(shù)篩選得到。ERRs和ERs分享了NRs家族的結(jié)構(gòu)特征,并且二者氨基酸序列和基因序列具有很高的同源性。其基因結(jié)構(gòu)主要為含有5個功能區(qū)的結(jié)構(gòu)域,其中研究比較多的是A/B、C、E區(qū):A/B區(qū)含

5、有配體結(jié)合區(qū)1(ligand-dependent activation function 1,AF-1),其特異性較低,可以結(jié)合不同的因子以激活靶基因；C區(qū)被稱為DNA結(jié)合區(qū)(DNA-binding domain,DBD),ERα和ERβ在此區(qū)的同源性高達95％,ERRα與ERα此區(qū)同源性為66％,ERRγ的DBD與ERRα相比有93％一致；E區(qū)含有一個被稱為激素結(jié)合區(qū)(ligand-binding domain,LBD)的結(jié)構(gòu)域和一個

6、配體結(jié)合區(qū)2(ligand-dependent activation function2,AF-2),ERα和ERβ在LBD的同源性達55％,ERRα與ERα此區(qū)同源性為33％。
　　 雌激素信號傳導(dǎo)中,ERs反應(yīng)元件ERE和ERRs的反應(yīng)元件(ERR responsiveelement,ERRE)也具有較高的同源性。ERE是5’-TGACCTnnnAGGTCA-3’反向回文序列(n為任一核苷酸),其核心為5’-AGGTCA-3

7、’序列。ERR單體識別的是則ERRE,該元件是具有相同核心并向5’端延伸3個核苷酸的序列,即5’-TnA-AGGTCA-3’。因此,ERs和ERRs均可識別以5’-AGGTCA-3’序列為核心的激素反應(yīng)元件,且ERRs在體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的天然配體,因此ERRs和ERs對ERE的轉(zhuǎn)錄活性具有相似性、競爭性。含有此核心序列的HRE結(jié)構(gòu)變異體在人體內(nèi)廣泛存在,比如:完整或不完整的ERE元件、ERRE元件、回文性的甲狀腺素反應(yīng)元件(thyroid

8、 response element,TRE)以及甾體生成因子-1(SF-1因子)的反應(yīng)元件(steroid factor-1 responsive element,SFRE)。這些都成為ERRs和ERs廣泛參與代謝并產(chǎn)生交互作用的基礎(chǔ)。因而兩個家族可能在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展方面也發(fā)揮了重要作用。
　　 有研究表明ERα和ERβ可以形成ERα同源二聚體、ERβ同源二聚體或ERα/ERβ異源二聚體與ERE結(jié)合,以不同的活性參與

9、調(diào)控不同配體的生物學(xué)效應(yīng)。ERRα也可以形成單體、同源二聚體識別ERRE產(chǎn)生雌激素效應(yīng)或與ERα形成異源性二聚體干擾ER的基因調(diào)控。而ERRα的作用及活性在某種程度上又取決于ERα對ERE的結(jié)合程度。ERRγ也是ERRα在表達過程中密切聯(lián)系的家族成員,有研究表明ERRγ有調(diào)節(jié)ERRα表達水平的作用。而小鼠實驗表明ERRα減少會引起ERRγ上調(diào)。因此,研究ERRα、ERRγ、ERα和ERβ在子宮內(nèi)膜組織表達對明確子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生發(fā)展有

10、著重要的意義。
　　 Ariazi等用real-time PCR的方法測量了ERRs和ERs在乳腺癌組織中的mRNA的表達,并評價了ERRα、ERRγ作為乳腺癌腫瘤標(biāo)記物的作用和及其在癌癥患者預(yù)后評估中的作用。Kraus等曾對ERα(+)的乳腺癌細胞和ERα(-)的宮頸癌細胞中的ERRα進行分析,他發(fā)現(xiàn)ERR-α與ERα的表達關(guān)系密切。孫蓬明等用實時熒光定量PCR方法測量了ERRs和ERs在卵巢癌組織中的mRNA的陽性表達率,也

11、認為ERRs與ERs在卵巢組織中的相互作用可能是卵巢癌復(fù)雜的腫瘤內(nèi)分泌生物學(xué)行為的分子基礎(chǔ)。鑒于既往研究的結(jié)果,我們認為作為雌激素依賴性腫瘤的子宮內(nèi)膜樣腺癌,其發(fā)生發(fā)展的過程有可能與兩個家族相互作用的分子機制有關(guān)。目前,國內(nèi)外的對ERR的研究主要停留在乳腺癌、卵巢癌上,對子宮內(nèi)膜癌的研究也主要停留在細胞學(xué)上,采用的方法也多是采用普通PCR或免疫組化所做的定性研究。而對屬于雌激素依賴性子宮內(nèi)膜癌的子宮內(nèi)膜樣腺癌的報道也頗為罕見。因此,本研

12、究擬對ERs和ERRs兩個核受體家族在子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病過程中的量的變化及相關(guān)關(guān)系進行探討。
　　 本研究采集子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本進行檢測,并納入癌旁組織與癌組織、正常組織比較。結(jié)合考慮腫瘤的生物學(xué)行為,及癌旁組織的病理類型,我們用癌旁組織評價正常內(nèi)膜發(fā)展到癌之間的癌前病變。采用Taqman熒光定量PCR的方法檢測ERRα、ERRγ、ERα和ERβ在子宮內(nèi)膜的癌變過程中mRNA的表達量的變化,并結(jié)合子宮內(nèi)膜樣腺癌患者的臨床病理資料進

13、行綜合分析,探討ERRs和ERs在子宮內(nèi)膜的癌變過程中表達的相關(guān)性及其臨床意義,以期為揭示子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生機制提供新的思路與靶點。
　　 方法與內(nèi)容：
　　 1.研究對象
　　 本研究共收集44例子宮內(nèi)膜樣腺癌組織、30例正常組織及30例癌旁組織,所有標(biāo)本均經(jīng)病理切片HE染色明確診斷后納入,手術(shù)病理分期按2000年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的標(biāo)準(zhǔn)進行分期,所有患者術(shù)前均未接受放、化療及激素治療。
　　

14、 2.研究方法
　　 采用TRIzol一步法提取所有組織總RNA,檢測所有組織總RNA的質(zhì)量和完整性,再將總RNA逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)成cDNA,采用熒光實時定量PCR的Taqman探針法測量所有組織標(biāo)本中ERα、ERβ、ERRα及ERRγmRNA的表達水平,用標(biāo)準(zhǔn)曲線的相對定量法計算目標(biāo)基因表達量。
　　 3.統(tǒng)計學(xué)方法
　　 采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。ERα、ERβ、ERRα、ERRγmRNA表達水平差異

15、及ERα/ERβ、ERα/ERRα、ERRα/ERRγ比值的變化三組比較采用非參數(shù)法Kruskal-Wallis H檢驗,進一步做兩兩比較采用Nemenyi法。采用Spearman等級相關(guān)分析癌組織中ERα、ERβ、ERRα、ERR-γ四項指標(biāo)與分期、分級的關(guān)系。P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.ERα、ERβ、ERRα及ERRγ四項指標(biāo)在癌旁組織中的表達均明顯高于正常組織和癌組織,即癌前組織中ERs