PTA1（CD226）分子配體的研究.pdf

1、血小板/T活化抗原1（Platelet and T cell activation antigen 1,PTA1）是1997年基因克隆成分的一個(gè)新分子,并在2000年第七屆國(guó)際人類白細(xì)胞分化抗原協(xié)作組大會(huì)上給予了新的CD編號(hào)為CD226.該文的目的就是鑒定PTA1L,為最終克隆PTA1L,全面了解PTA1-PTA1L的生理、病理功能及其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)打下基礎(chǔ).為此,我們首先純化了抗人PTA1單克隆抗體（mAb）LeoA1,并制備成親和層

2、析柱,以此為工具從穩(wěn)定表達(dá)PTA1/Ig融合蛋白的中國(guó)倉(cāng)鼠卵母細(xì)胞系（CHO）培養(yǎng)上清中大量純化PTA1/Ig融合蛋白.采用間接免疫熒光染色,對(duì)多種細(xì)胞系進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析并觀察PTA1L的分布發(fā)現(xiàn),PTA1L的分布及表達(dá)水平隨細(xì)胞系的不同而變化,以人內(nèi)皮細(xì)胞系ECV304細(xì)胞表達(dá)水平最高,達(dá)67.8﹪.通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)觀察了系列抗人PTA1mAbs對(duì)PTA1/Ig融合蛋白與ECV304細(xì)胞結(jié)合的阻斷作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)LeoA1能夠完全阻斷P

3、TA1與其配體的結(jié)合,提示LeoA1所識(shí)別的PTA1抗原表位可能是其與配體結(jié)合或靠近的功能表位.為了確定PTA1L的分子量,我們采用生物素標(biāo)記技術(shù),對(duì)高水平表達(dá)PTA1L的ECV304細(xì)胞進(jìn)行了生物素標(biāo)記,經(jīng)Protein-A及人IgG1預(yù)清除后,采用PTA1/Ig融合蛋白進(jìn)行免疫沉淀,通過(guò)Western-Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),PTA1L可能為一分子量大于220kD的蛋白.該研究的結(jié)果為進(jìn)一步克隆PTA1L、全面了解PTA1-PTA1L的功