幽門螺桿菌對GES-1細(xì)胞GATA3、Cx32、Cx43表達(dá)的影響及其相關(guān)性分析.pdf

1、目的:本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)感染胃“炎-癌鏈”不同階段（慢性非萎縮性胃炎→慢性萎縮性胃炎→腸上皮化生→異型增生→胃癌）胃黏膜組織的Cx32、Cx43表達(dá)逐漸降低，而GATA3表達(dá)逐漸升高，生物信息軟件分析發(fā)現(xiàn)Cx32、Cx43啟動子區(qū)域存在多個GATA3結(jié)合部位，提示GATA3可能調(diào)控Cx32、Cx43表達(dá)。本課題擬通過細(xì)胞模型，觀察H.pylori對GES-1細(xì)胞GA

2、TA3表達(dá)的影響及其與Cx32、Cx43表達(dá)的關(guān)系，探討H.pylori感染是否通過GATA3改變導(dǎo)致Cx32、Cx43表達(dá)降低而與胃癌發(fā)生有關(guān)。
　　方法:實驗組將臨床分離自胃癌病人的東亞型CagA+H.pylori菌株與GES-1細(xì)胞按50∶1共培養(yǎng)12h，24h，對照組不加H.pylori培養(yǎng)12h、24h。采用Real-time PCR及免疫印跡法(Western-blotting)檢測GES-1細(xì)胞GATA3、Cx32、

3、Cx43 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá);劃痕標(biāo)記熒光染料示蹤技術(shù)(SLDT)檢測GES-1細(xì)胞GJIC功能。同時采用陽離子脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染GATA3 siRNA序列至前期篩選出GATA3表達(dá)量最高的人胃癌細(xì)胞株BGC803，檢測GATA3 siRNA干擾效果及轉(zhuǎn)染后Cx32、Cx43表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:(1)GATA3表達(dá):實驗組H.pylori感染GES-1細(xì)胞GATA3表達(dá)在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平隨著培養(yǎng)時間延長有升高趨勢，24h表達(dá)量較12

4、h及對照組24h均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(2) Cx32、Cx43表達(dá):實驗組H.pylori感染后GES-1細(xì)胞Cx32、Cx43表達(dá)在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平均有下降趨勢，24h表達(dá)量較12h及對照組24h均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(3)GJIC功能改變:對照組GES-1細(xì)胞熒光染料向鄰近細(xì)胞傳遞3-4列，具有較強(qiáng)的GJIC功能;實驗組熒光染料大多局限于劃痕旁的單列細(xì)胞，僅極少數(shù)傳遞1-2列，GJIC功能明顯

5、減弱或缺失。(4) GATA3與Cx32、Cx43表達(dá)的關(guān)系:H.pylori感染GES-1細(xì)胞后GATA3與Cx32、Cx43在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05); BGC803細(xì)胞轉(zhuǎn)染GATA3 siRNA后GATA3與Cx32、Cx43在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1、H.pylori上調(diào)GES-1細(xì)胞GATA3表達(dá)，同時下調(diào)Cx32、Cx43表達(dá)，降低細(xì)胞GJIC功能。2、GATA3