人羊膜上皮細(xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞在大鼠受損肝組織中分化成人肝細(xì)胞.pdf

1、目的：重癥肝病尚無特效療法，細(xì)胞移植治療肝損傷疾病是一種值得探索的新途徑。羊膜上皮和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞具有干細(xì)胞特性，在體外適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下均可分化為肝細(xì)胞，其體內(nèi)是否可以作為肝細(xì)胞供體治療肝損傷疾病尚未探明。本研究的目的是尋找人羊膜細(xì)胞在大鼠肝損傷原位分化為肝細(xì)胞的證據(jù)，為其作為細(xì)胞供體臨床治療肝損傷疾病提供實驗依據(jù)。 方法：采用二酶消化法從人羊膜組織中分離hAECs和hAMCs，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）和免疫熒光染色進(jìn)行表型分析

2、和細(xì)胞鑒定。采用腹腔注射D—氨基半乳糖，按400mg/kg建立大鼠肝損傷模型，隨機分為hAECs移植組、hAMCs移植組和對照組，每組20只。造模后24h用微量注射器于肝左、中、右葉3點分別注射L—DMEM懸浮的hAECs或hAMCs懸液50μl（約1×106個細(xì)胞），對照組注射等量L—DMEM。于移植后48h、1w、2w、3w或4w處死各實驗組3～4大鼠，取移植部位行常規(guī)病理學(xué)檢查和行免疫熒光染色或免疫組化染色以觀察肝組織病理變化、h

3、AECs和hAMCs在受損肝原位的植活與分布及其甲胎蛋白（AFP）、CK18、CK19和白蛋白（Alb）的表達(dá)情況。 結(jié)果：①FCM分析結(jié)果顯示，所分離的hAECs幾乎不表達(dá)CD44，而hAMCs中則部分表達(dá)CD44；免疫熒光染色顯示hAECs只表達(dá)CK19，而hAMCs只表達(dá)波形蛋白。②與對照組比較，hAECs和hAMCs移植組于移植后48h肝門管區(qū)嗜堿性小細(xì)胞增多，肝細(xì)胞壞死較輕；移植后7d肝小葉結(jié)構(gòu)較為完整。③免疫熒光染色