兔耳病理性瘢痕經(jīng)瘢痕皮回植術(shù)后組織中MMP-1、TIMP-1表達(dá)變化的研究.pdf

1、背景：瘢痕(scar)的形成是組織損傷修復(fù)的正常過(guò)程，適度的瘢痕形成是一種生理性和自衛(wèi)性的表現(xiàn)，然而過(guò)度增生則屬于病理性改變。病理性瘢痕(abnormalscar)臨床表現(xiàn)為局部組織增生、增厚、痛癢不適、活動(dòng)受限，是整形外科，甚至是整個(gè)醫(yī)學(xué)界工作和研究難點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。病理性瘢痕的發(fā)生機(jī)制至今尚未清楚，因此在治療上難以取得突破。雖然目前臨床上治療病理性瘢痕的方法很多，但是尚沒(méi)有一種理想的治療方法。其中瘢痕皮回植能避免或減少自體皮膚的移植而

2、達(dá)到治療的目的。但治療機(jī)制尚未完全清楚，缺乏相關(guān)的基礎(chǔ)研究。
　　 瘢痕形成與基質(zhì)金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinases，MMPs）因素有關(guān)。MMPs是膠原降解的關(guān)鍵酶，能降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原；其表達(dá)和活性受到多種因素的調(diào)控。MMPs的調(diào)控以特異性的酶抑制劑(Tissueinhibitorofmetalloproteinases，TIMPs)最為重要，二者的平衡在機(jī)體內(nèi)對(duì)穩(wěn)定細(xì)胞外基質(zhì)起著關(guān)鍵的作用。

3、>　　 目的：本研究應(yīng)用兔耳模型觀察基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)、TIMP-1在病理性瘢痕經(jīng)瘢痕皮回植術(shù)后組織中表達(dá)的變化，探討瘢痕皮回植治療病理性瘢痕的機(jī)制，從而為此種方法提供可能的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.兔耳增生性瘢痕動(dòng)物模型的制備：
　　 健康新西蘭兔，雌雄不限（不包括孕兔），清潔級(jí)，體重2±0.2kg。在兔耳腹側(cè)面切除皮膚及軟骨膜保留軟骨，形成1×2cm的創(chuàng)面，上中下各一個(gè)，內(nèi)外側(cè)各一列

4、，共120個(gè)創(chuàng)面。
　　 2實(shí)驗(yàn)分組：
　　 A組（正常對(duì)照組）：即造模前切除之皮膚；
　　 B組（增生瘢痕組）：30天形成增生性瘢痕時(shí)取同側(cè)耳廓一列增生性瘢痕組織；
　　 C組（瘢痕皮回植術(shù)組）：將同側(cè)耳廓另外一列瘢痕塊做瘢痕皮回植術(shù)，在術(shù)后28天的瘢痕組織。
　　 3觀察指標(biāo)：
　　 切除之兔耳皮膚及瘢痕組織，10％中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟制片。行HE染色和MASSON特殊組織化學(xué)染

5、色觀察模型建立的情況；行免疫組織化學(xué)染色方法觀察各組皮膚MMP-1、TIMP-1的表達(dá)情況。
　　 4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果：
　　 1模型的建立
　　 創(chuàng)面處理30天后，觀察增生性瘢痕形成情況。發(fā)現(xiàn)120個(gè)創(chuàng)面中有70個(gè)創(chuàng)面形成增生性瘢痕。兔耳瘢痕呈淡紅或暗紅色，質(zhì)地較硬韌，局部隆起高于周圍正常皮膚，厚度＞0.5cm，且瘢痕向中心區(qū)呈現(xiàn)攣縮趨勢(shì)，兔耳不平展，耳緣卷曲。

6、　　 創(chuàng)面處理30天增生性瘢痕形成率為58.33％。沿原切口切開皮膚，完整切取同側(cè)耳廓一列增生性瘢痕組織共35例瘢痕，即為實(shí)驗(yàn)B組觀察例數(shù)。
　　 在取材增生性瘢痕時(shí)，完整切取余35例增生性瘢痕組織，行經(jīng)瘢痕皮回植術(shù)。術(shù)后28天觀察，回植處瘢痕組織共形成30例，即為實(shí)驗(yàn)C組觀察例數(shù)?；刂残g(shù)瘢痕造模成功率為85.71％。經(jīng)瘢痕皮回植術(shù)后該區(qū)域皮膚較回植前顏色轉(zhuǎn)淡，瘢痕未再增生、增厚，質(zhì)地變軟。
　　 2HE染色結(jié)果觀察：

7、
　　 正常對(duì)照A組：鱗狀上皮薄，基底細(xì)胞層排列整齊，基底膜平坦，表面可見角化。皮下含有紅染的纖維及平滑肌樣組織，可見皮脂腺。
　　 實(shí)驗(yàn)B組：鱗狀上皮較正常對(duì)照A組明顯增厚，基底細(xì)胞層增生，基底膜欠平滑。上皮表面可見角化，皮下為成片紅染的纖維樣組織-即為瘢痕組織，瘢痕組織內(nèi)含少量炎細(xì)胞和血管成分。
　　 實(shí)驗(yàn)C組：鱗狀上皮仍較厚，基底細(xì)胞層增生，基底膜欠平滑。上皮表面可見角化，皮下成片紅染的纖維樣組織內(nèi)，可見多

8、量紅細(xì)胞、炎細(xì)胞、血管和毛細(xì)血管。
　　 3MASSON染色結(jié)果觀察：
　　 正常對(duì)照A組；鱗狀上皮下，可見染色呈紅色的平滑肌組織占有很大比例；在紅色的平滑肌組織間，間有少量染成綠色的纖維組織。
　　 實(shí)驗(yàn)B組：鱗狀上皮下，幾乎見不到染色呈紅色的平滑肌組織；與正常對(duì)照A組相反，占有很大比例的是染成綠色的纖維組織。
　　 實(shí)驗(yàn)C組：鱗狀上皮下，占有很大比例的仍是染成綠色的纖維組織內(nèi)，在纖維組織內(nèi)可見較多炎細(xì)

9、胞、血管及毛細(xì)血管。
　　 4免疫組織化學(xué)染色4.1MMP-1的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果A組：MMP-1在A組為陰性表達(dá)，半定量分析值1.70±0.48。
　　 B組：MMP-1表達(dá)在表面鱗狀上皮細(xì)胞和瘢痕組織中，半定量分析值為4.57±0.50。統(tǒng)計(jì)分析顯示，MMP-1的表達(dá)較正常對(duì)照A組明顯升高(P＜0.01)C組：在形成的瘢痕組織和表面鱗狀上皮和瘢痕中MMP-1表達(dá)，在上皮內(nèi)中表層細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng)，半定量分析值為5.3

10、3±0.61。統(tǒng)計(jì)分析表明，C組MMP-1的表達(dá)較正常對(duì)照A組明顯升高(P＜0.01)，且較B組表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.01)。
　　 4.2TIMP-1的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果A組TIMP-1在A組為陰性表達(dá)，半定量分析值1.90±0.32。
　　 B組：瘢痕組織和表面鱗狀上皮可見TIMP-1表達(dá)，在上皮內(nèi)中底層細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng)，半定量分析值為5.06±0.59。統(tǒng)計(jì)分析顯示，B組TIMP-1的表達(dá)較正常對(duì)照A組明顯升高(P＜

11、0.01)。
　　 C組：在形成的瘢痕組織和表面鱗狀上皮和瘢痕中TIMP-1表達(dá)，在上皮內(nèi)以中層細(xì)胞表達(dá)明顯，半定量分析值為4.23±0.43。統(tǒng)計(jì)分析表明，C組TIMP-1的表達(dá)較正常對(duì)照A組明顯升高(P＜0.01)，且較B組表達(dá)減弱(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：經(jīng)兔耳可成功制成增生性瘢痕和瘢痕皮回植術(shù)模型；瘢痰皮回植術(shù)瘢痕治療的機(jī)制與瘢痕組織內(nèi)MMP-1和TIMP-1表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)：MMP-1表達(dá)增強(qiáng)較TIMP-1明