鞣花酸對骨髓瘤SP2-0細胞的生物學作用.pdf

1、目的:本研究課題以小鼠骨髓瘤SP2/0細胞株作為研究對象，運用了體外細胞培養(yǎng)和分子生物學技術(shù)等科研方法，探索鞣花酸對多發(fā)性骨髓瘤細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響并檢測與癌細胞發(fā)生、發(fā)展密切關(guān)聯(lián)的腫瘤相關(guān)分子COX-2的表達情況。通過分析鞣花酸對小鼠骨髓瘤SP2/0細胞的生物學作用，為臨床手術(shù)治療MBD，有效清除病灶內(nèi)骨髓瘤細胞提供實驗依據(jù)。
　　方法:體外培養(yǎng)小鼠骨髓瘤SP2/0細胞，設立3個階梯濃度藥物組和1個對照組，對照組不用鞣

2、花酸干預，實驗組分別加入20，40和60μg/ml鞣花酸干預。1、用倒置顯微鏡觀察，不同濃度鞣花酸處理的實驗組和對照組骨髓瘤SP2/0細胞48h后的細胞形態(tài)學變化并拍照。2、用20，40和60μg/ml鞣花酸處理骨髓瘤SP2/0細胞48h后，采用Hoechst33258染色法染色，然后在倒置熒光顯微鏡下對比實驗組與對照組細胞的凋亡情況并拍照。3、通過細胞增殖實驗（MTT法）檢測以上濃度鞣花酸處理48h后的SP2/0細胞的細胞增殖情況及細

3、胞活性。4、收集以上4組處理24h后的SP2/0細胞，用流式細胞儀檢測鞣花酸對骨髓瘤SP2/0細胞早期凋亡的影響。5、用流式細胞儀測定，以上濃度藥物處理48h后的SP2/0細胞各個細胞周期中的細胞比率。6、通過Western blotting技術(shù)檢測腫瘤增值與凋亡相關(guān)蛋白COX-2在不同濃度藥物處理后的SP2/0細胞中表達量的變化。
　　結(jié)果:1、不同濃度藥物處理48h后的SP2/0細胞與對照組相比，隨鞣花酸濃度的增高，有活性的貼

4、壁細胞數(shù)量逐漸減少，同時培養(yǎng)液中漂浮的死亡細胞不斷增多。2、在倒置熒光顯微鏡下觀察Hoechst33258染色后的細胞，對照組細胞核呈現(xiàn)彌散、均勻的藍色熒光，實驗組隨藥物濃度增加染色細胞數(shù)量逐漸減少并且在細胞中可見濃染的致密熒光。3、細胞增殖實驗發(fā)現(xiàn)，20，40和60μg/ml鞣花酸孵育組細胞生長抑制率分別為(21.18±5.92)％，(44.58±3.43)％和(70.15±2.90)％，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

5、4、細胞早期凋亡率檢測，實驗組SP2/0細胞的早期凋亡率分別為(9.60±0.56)％，(19.30±1.51)％和(35.10±5.26)％，與對照組(3.23±0.85)％比較，p＜0.01，差別具有統(tǒng)計學意義。5、細胞周期分析顯示，鞣花酸孵育骨髓瘤SP2/0細胞株48h后，細胞周期阻滯于G1期，G1期細胞百分率分別為(55.21.±3.01)％，(64.48±0.43)％，(75.10±2.46)％，與對照組的(34.04±1.7