葡萄根癌病生防菌株Agrobacterium vitis E26無致病性的初步研究.pdf

1、葡萄根癌病是由葡萄土壤桿菌(Agrobacterium vitis)引起的世界性病害，在生產(chǎn)上能夠造成重大經(jīng)濟(jì)損失。葡萄土壤桿菌E26菌株(A.vitis E26)無致病性，是一株有應(yīng)用前景的根癌病生防菌株。前期研究表明，E26菌株可能存在一個(gè)與根癌土壤桿菌C58(A.tumefaciens C58)的Ti質(zhì)粒(pTiC58)大小近似、部分DNA序列同源的質(zhì)粒；該質(zhì)?？赡苋笔Я藀TiC58的關(guān)鍵致瘤基因。本研究運(yùn)用PCR和Souther

2、n雜交相結(jié)合的方法對(duì)E26菌株中是否存在土壤桿菌致病菌株中所存在的部分關(guān)鍵致瘤基因進(jìn)行檢測(cè)。 根據(jù)部分土壤桿菌致病菌株中存在的關(guān)鍵致瘤基因(virA，virG，iaaH,iaaM和ipt)各自的保守序列分別設(shè)計(jì)引物，以E26菌株基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。根據(jù)A.vitisS4的virA，virG，iaaM和枷及A.vitis K308的iaaH的保守序列分別合成探針，與E26菌株基因組DNA進(jìn)行Southern

3、雜交，結(jié)果均為陰性。根據(jù)A.tumefaciens C58的virA，virG和iaaM的保守序列分別合成探針，與E26菌株基因組DNA進(jìn)行Southem雜交，結(jié)果也均為陰性。 根據(jù)致病菌株A.vitis CG49的引起葡萄根部壞死相關(guān)基因pehA(編碼多聚半乳糖醛酸酶)和生防菌株A. vitis F2/5的趨化性相關(guān)基因chvA(編碼β-1-2-葡聚糖運(yùn)輸?shù)鞍?的DNA序列分別設(shè)計(jì)引物，通過PCR，克隆到E26菌株中的同源基因

4、，分別命名為pehA<,E26>和chVA<,E26>。在核苷酸序列水平上，pehA<,E26>和pehA<,CG49>有92％的相似性，chVA<,E26>和chvA<,F2/5>有94％的相似性；在氨基酸序列水平上，PehA<,E26>和PehA<,CG49>有94％的相似性，ChvA<,E26>和ChvA<,F2/5>有98％的相似性。pehA<,E26>和chvA<,E26>撕基因的功能有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。 本研究初步證