Cx43在PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細胞增殖中的作用.pdf

1、目的:
　　本實驗旨在通過Cx43 siRNA下調(diào)VSMCs Cx43蛋白表達，并用PDGF-BB與ERK1/2特異性阻斷劑PD98059處理細胞，探討Cx43在PDGF-BB誘導(dǎo)的大鼠VSMCs增殖中的作用及信號通路機制。
　　方法:
　　1.通過脂質(zhì)體將Cx43 siRNA轉(zhuǎn)染入大鼠胸主動脈VSMCs，使VSMCs低表達Cx43蛋白，檢測沉默效率。
　　2.MTT比色法檢測各組VSMCs活性。實驗分為6組:①

2、PDGF-BB組;②Cx43 siRNA+PDGF-BB組;③Scramble RNA+PDGF-BB組;④PD98059+PDGF-BB組;⑤Cx43 siRNA+PD98059+PDGF-BB組;⑥ScrambleRNA+PD98059+PDGF-BB組。下同。
　　3.流式細胞技術(shù)檢測各組VSMCs增殖率。
　　4.Western blot分別檢測Cx43，p-Cx43，p-ERK1/2及cyclin E蛋白表達。

3、r>　　結(jié)果:
　　1.Western blot結(jié)果顯示，Cx43 siRNA組Cx43蛋白表達為對照組的47％，提示Cx43 siRNA沉默效果良好(P＜0.01)。
　　2.MTT比色法顯示Cx43 siRNA+PDGF-BB組較PDGF-BB組吸光度值顯著減小(P＜0.01);Cx43 siRNA+PD98059+PDGF-BB組較Cx43 siRNA+PDGF-BB組吸光度值顯著減小(P＜0.05)。
　　3.

4、流式細胞技術(shù)結(jié)果顯示Cx43 siRNA+PDGF-BB組增殖率較PDGF-BB組顯著減?。≒＜0.01）;Cx43 siRNA+PD98059+PDGF-BB組增殖率較Cx43siRNA+PDGF-BB組顯著減小(P＜0.05)，提示Cx43低表達，PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖能力明顯下降;ERK1/2通路被阻斷后PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs增殖能力也顯著下降。
　　4.Western blot結(jié)果顯示:
　?、貱

5、x43 siRNA+PDGF-BB組比PDGF-BB組Cx43蛋白表達顯著減少(P＜0.05);Cx43 siRNA+PD98059+PDGF-BB組比Cx43 siRNA+PDGF-BB組Cx43蛋白表達顯著減少(P＜0.05)，提示Cx43 siRNA沉默效果良好，且ERK1/2途徑被阻斷后，Cx43蛋白表達明顯下調(diào)。
　?、赑D98059+PDGF-BB組比PDGF-BB組p-Cx43蛋白表達明顯降低(P＜0.05)，提示E

6、RK1/2途徑被阻斷后，p-Cx43蛋白表達顯著下調(diào)。
　　③Cx43 siRNA+PDGF-BB組比PDGF-BB組p-ERK1/2蛋白表達明顯減少(P＜0.05); Cx43 siRNA+PD98059+PDGF-BB組比Cx43 siRNA+PDGF-BB組p-ERK1/2蛋白表達顯著下降(P＜0.05)，提示Cx43蛋白低表達促進了p-ERK1/2蛋白表達水平明顯降低。
　?、蹸x43 siRNA+PDGF-BB組比

7、PDGF-BB組cyclin E蛋白表達明顯減少(P＜0.01);Cx43 siRNA+PD98059+PDGF-BB組比Cx43 siRNA+PDGF-BB組cyclinE蛋白表達明顯下降(P＜0.05)，提示Cx43蛋白低表達，促進cyclin E蛋白表達水平明顯下調(diào)，兩者呈正相關(guān);同時阻斷ERK1/2通路，cyclin E蛋白表達更低。
　　結(jié)論:
　　1.RNA干擾特異性沉默Cx43蛋白表達后，能顯著抑制PDGF-B