丹參酮ⅡA對(duì)PDGF-BB誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞蛋白質(zhì)組的影響.pdf

1、目的：利用細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)研究丹參酮ⅡA(TanshinoneⅡA，TSNⅡA)對(duì)PDGF-BB誘導(dǎo)的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(Human aortic vein smooth muscle cells，HAVSMC)細(xì)胞增殖的影響，并通過差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選并鑒定差異蛋白質(zhì)，分析其生物學(xué)功能，為丹參酮ⅡA的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)為中藥多靶點(diǎn)抗動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)的研究提供實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
　　方法：體外培

2、養(yǎng)HAVSMC，用不同濃度的丹參酮ⅡA和10μg/L PDGF-BB處理HAVSMC細(xì)胞24h。1）檢測細(xì)胞的增殖情況。2）利用流式細(xì)胞儀檢測HAVSMC細(xì)胞周期情況。3)利用雙向熒光差異凝膠電泳（Two dimension difference gel electrophoresis，2D-DIGE）結(jié)合質(zhì)譜鑒定技術(shù)篩選并鑒定丹參酮ⅡA作用前后差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。4）差異蛋白的功能分析。
　　結(jié)果：1）MTT結(jié)果顯示：低于0.5μ

3、g/mL丹參酮ⅡA對(duì)PDGF-BB處理后HAVSMC細(xì)胞增殖無顯著性影響(P＞0.05);當(dāng)?shù)⑼駻濃度大于等于1μg/mL時(shí)，PDGF-BB處理后HAVSMC細(xì)胞增殖活力受到顯著抑制(P＜0.01);實(shí)驗(yàn)采用1μg/mL，2μg/mL，4μg/mL的丹參酮ⅡA進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2)與正常組比較，①PDGF-BB誘導(dǎo)HAVSMC細(xì)胞增殖模型組中，G1期細(xì)胞比例減少，S期增加，G2期增加，表明PDGF-BB可以促進(jìn)HAVSMC細(xì)

4、胞增殖;②2，4μg/mL丹參酮ⅡA處理HAVSMC細(xì)胞后，G1期的細(xì)胞比例增加，S期減少，G2期減少，說明丹參酮ⅡA可使細(xì)胞周期停滯于G1期，從而抑制HAVSMC細(xì)胞增殖。TSNⅡA+PDGF-BB組與PDGF-BB誘導(dǎo)模型組比較，在低濃度組和中濃度組(1，2μg/mL丹參酮ⅡA)時(shí)細(xì)胞周期無明顯差異，4μg/mL丹參酮ⅡA可使PDGF-BB誘導(dǎo)的HAVSMC細(xì)胞G1期的細(xì)胞比例增加，S期減少，G2期減少，說明丹參酮ⅡA同樣可使PDG

5、F-BB誘導(dǎo)的HAVSMC細(xì)胞停滯于G1期，從而抑制HAVSMC細(xì)胞的過度增殖。
　　3)蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)表明：丹參酮ⅡA作用PDGF-BB誘導(dǎo)HAVSMC細(xì)胞后，46個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)發(fā)生變化，有44個(gè)表達(dá)量都是減少的，只有2個(gè)表達(dá)量是增加的，其中蛋白質(zhì)二硫化物異構(gòu)酶、熱休克蛋白60、分子伴侶T、不均一核糖核蛋白K、角蛋白1型細(xì)胞骨架9、E3泛素蛋白鏈激酶、亮氨酸拉鏈樣轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器1、鋅指FYVE封閉鄰域蛋白19、波形蛋白、非常規(guī)肌球蛋白

6、、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3、鹽皮質(zhì)激素受體、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1、T復(fù)合蛋白、嗜熱重復(fù)封閉大師家族成員2A、線粒體細(xì)胞色素bc1復(fù)合體、干擾素α8、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、鋅指蛋白229、DNADH脫氫酶輔酶Q黃素蛋白復(fù)合物、平滑肌細(xì)胞分化特異性抗原、鋅指蛋白394、驅(qū)動(dòng)樣蛋白、鋅指蛋白618、Ras-EF手域蛋白、溶質(zhì)載體家族、肌動(dòng)蛋白2、甘氨酰轉(zhuǎn)移核糖核酸合成酶、線粒體ATP合成酶、筑絲蛋白4、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78、原

7、肌球蛋白β鏈、原肌球蛋白α4鏈、Ras-Rab相關(guān)蛋白39A、原肌球蛋白α3鏈、LIM區(qū)特定蛋白7、鋅指印3、微管結(jié)合蛋白6、DNADH脫氫酶輔酶Q黃素蛋白復(fù)合物、跨膜蛋白2隔膜蛋白、nesprin-2蛋白、線粒體應(yīng)激蛋白、肌球蛋白輕鏈6表達(dá)量降低，而半胱氨酸連接酶、酪氨酸蛋白激酶表達(dá)量增加，這些差異蛋白的功能主要涉及氧化應(yīng)激、細(xì)胞物質(zhì)能量代謝、細(xì)胞組分和細(xì)胞骨架、信號(hào)傳導(dǎo)和基因表達(dá)調(diào)控。
　　結(jié)論：1）10μg/L的PDGF-B