獼猴桃果肉顏色的遺傳差異與種質(zhì)鑒定.pdf

1、本研究采用RAPD技術(shù)對來源于蒼溪和雅安兩地的21個獼猴桃栽培品種進(jìn)行遺傳分析，并選取部分來源于蒼溪的已知品種為對照，對來源于雅安的部分未知品種進(jìn)行鑒定，以期為雅安獼猴桃栽培品種真實性提供科學(xué)依據(jù)。同時研究不同果肉顏色的獼猴桃品種間的遺傳差異，分析它們的遺傳背景，以期發(fā)掘重要的農(nóng)藝性狀基因，為合理利用種質(zhì)資源以及選配雜交育種親本、選育紅色果肉優(yōu)良的獼猴桃新品種提供理論依據(jù)。結(jié)果如下： 1.通過核酸沉淀外觀觀察、紫外分光光度分析、

2、凝膠電泳檢測和PCR擴增反應(yīng)對獼猴桃基因組DNA提取的三種方法比較，認(rèn)為CTAB區(qū)室法不能有效提取獼猴桃基因組，SDS法和改良CTAB法雖均得到了完整的DNA亮帶，但從PCR擴增結(jié)果看，改良CTAB法較SDS法擴增條帶多且清晰。因此，改良CTAB法更適合獼猴桃基因組的提取。 2.采用常規(guī)的單因素試驗設(shè)計法對獼猴桃RAPD反應(yīng)主成分和循環(huán)參數(shù)進(jìn)行多次優(yōu)化得出，適合獼猴桃RAPD擴增的最佳反應(yīng)體系為25μL反應(yīng)體系中含模板DNA30

3、ng，10×buffer2.5μL，Mg<'2+>2.0mmol/L，引物0.6pmol/L，dNTPs0.20mmol/L，TaqDNA聚合酶1.6U。反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性5min；94℃1min，36℃退火lmin，72℃延伸2min，45個循環(huán)；72℃繼續(xù)延伸10min，4℃保溫。 3.以果實性狀差異較大、來自不同地區(qū)的三份材料‘紅陽’(蒼溪)、‘海沃德’(蒼溪)和綠果肉2號為試材，在90條RAPD隨機引物中篩選出21

4、條擴增效果較好的引物。2l條引物共擴增出267條DNA譜帶，其中多態(tài)性條帶有228條，占擴增總帶數(shù)的83.7％。所有供試材料間的遺傳距離(GD)變異范圍為O.12～0.54，平均GD值為0.36。其中，雅安材料的GD值為0.21～0.54，蒼溪材料GD值為0.14～0.47。聚類結(jié)果分析顯示，類群的劃分與材料間的親緣關(guān)系有關(guān)，也與其地理分布有聯(lián)系，但與果肉顏色無直接相關(guān)性，本文就此結(jié)果展開了討論。 4.四川雅安引種時意外發(fā)現(xiàn)的兩

5、株果實心室和果肉全為紅色的變異植株盡管在形態(tài)上極為相似，但聚類圖上卻沒有優(yōu)先聚類，而是分別與其他形態(tài)差異較大的品種交叉相聚，說明了獼猴桃果肉顏色的復(fù)雜性。 5.本文RAPD檢測到較高的多態(tài)性條帶比率(83.7％)，說明了雅安和蒼溪兩地獼猴桃栽培品種間存在較大遺傳差異。但21個RAPD引物在21個獼猴桃品種中未檢測到品種的特異性條帶。因此，目前RAPD還不能實際用于獼猴桃品種的鑒定，而只能用于已知特定材料的真實性鑒定。鑒定結(jié)果表明