先兆子癇病理相關基因的克隆.pdf

1、第一軍醫(yī)大學碩士學位論文先兆子癇病理相關基因的克隆姓名：張克榮申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科指導教師：邢福祺龐戰(zhàn)軍20030528先兆子癇病理相關基因的克隆中文摘要目的：應用抑制性消減雜交克隆技術，初步篩選出與先兆子癇有關的高表達基因和／或新基因，并進一步在大樣本中觀察篩選出的基因表達情況，為明確先兆子癇基因?qū)W病理機制提供理論依據(jù)。方法：我們以先兆子癇胎盤和正常妊娠胎盤為研究對象，采用抑制性消減雜交技術、基因克隆等技術，篩選出與先兆子癇

2、有關的高表達基因和戚新基因。在標本的采集上，盡量減少孕婦其它因素對該研究的影響，如標本均選取剖宮產(chǎn)胎盤，孕婦年齡、孕周、胎次、婚史等盡可能接近，同時排除高血壓、腎臟疾病史。1、采用一步法提取總RNA方法，分別從先兆子癇病人和正常妊娠分娩胎盤中提取總RNA，采用磁珠分離系統(tǒng)進一步分離出mRNA。紫外分光光度計檢測其濃度，測定A260／A280nm、A260／A230um吸光度值以估計RNA樣品的純度，甲醛變性膠電泳分析RNA的完整性：2、

3、采用抑制性消減雜交技術，以mRNA為逆轉(zhuǎn)錄模板合成eDNA，進行兩次雜交和兩次PCR擴增，并對擴增產(chǎn)物、消減效率進行分析；3、PCR產(chǎn)物轉(zhuǎn)入活化的JMl09大腸桿菌中，克隆并進行藍／白斑篩選，從而成功構建出消減cDNA文庫；4、對構建的先兆子癇胎盤消減cDNA文庫，采用反向雜交驗證，挑選出先兆子癇中的高表達基因，并測序分析；5、對測序發(fā)現(xiàn)的先兆子高表達基因在大樣本胎盤mRNA進行斑點雜交觀察其表達情況，統(tǒng)計學分析其意義。結(jié)果：1、總RN