SOCS3在細(xì)胞模型及難治性慢性乙肝患者PBMC中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：最近研究顯示,細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)是一種IFN信號(hào)分子的調(diào)節(jié)因子,參與機(jī)體的免疫反應(yīng)過(guò)程,影響IFN抗病毒療效。本研究擬探討SOCS3在HBV復(fù)制的細(xì)胞模型和難治性慢性乙肝患者中的表達(dá)及意義。
　　方法：選用本實(shí)驗(yàn)室保存的HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞兩種細(xì)胞系。HepG2為人肝癌細(xì)胞系,HepG2.2.15細(xì)胞是有HBV復(fù)制的Hep

2、G2細(xì)胞,可作為HBV復(fù)制感染模型。選用普通干擾素IFNα-2a(商品名因特芬)作為刺激因子,收集干擾素(IFN)刺激前的兩種細(xì)胞及干擾素刺激6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的兩種細(xì)胞,用RealTime-PCR方法和Western-Blot方法分別從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測(cè)細(xì)胞中SOCS3的表達(dá);本實(shí)驗(yàn)中難治性慢性乙肝患者指的是先前已使用抗病毒藥物恩替卡韋治療9-36個(gè)月HBeAg陽(yáng)性的慢性乙肝患者,經(jīng)過(guò)恩替卡韋治療后HB

3、VDNA已轉(zhuǎn)陰但尚未發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換,且HBeAg<1000PEIU/ml。符合條件的患者再按照隨機(jī)分組的原則分為A、B兩個(gè)組。其中A組患者將聯(lián)合使用長(zhǎng)效干擾素和恩替卡韋8周,后單用長(zhǎng)效干擾素PEG-IFNα-2a繼續(xù)治療至一年后停藥,B組繼續(xù)使用恩替卡韋治療。我們從A、B兩組中分別選取20名患者,在基線、4周、12周、24周采集外周血并提取PBMC。然后提取PBMC中的RNA和蛋白,用RealTime-PCR和Western-

4、Blot方法研究SOCS3的表達(dá)。
　　結(jié)果：Real-timePCR和Western-Blot結(jié)果顯示,在未使用干擾素時(shí)(即基線水平),HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞均有SOCS3的表達(dá),且HepG2.2.15細(xì)胞中SOCS3的基線表達(dá)高于HepG2細(xì)胞(p<0.05);HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞在干擾素刺激后(6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí))SOCS3的表達(dá)量是增高的,其中以刺激后6小時(shí)的SOCS3表達(dá)量最

5、高,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。在干擾素刺激后,相同時(shí)間點(diǎn)(6,12,24小時(shí))HepG2.2.15細(xì)胞中SOCS3的表達(dá)均高于HepG2細(xì)胞(6小時(shí),12小時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異p<0.05)。在參與本藥物試驗(yàn)的難治性慢性乙肝患者PBMC中,接受干擾素治療的A組患者,治療后不同階段SOCS3在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)與治療前相比較均有增高(p<0.05),SOCS3在蛋白水平的表達(dá)也較治療前增高;而在使用恩替卡韋的B組患者的PBMC中,SOCS3的