水稻白葉枯病菌Tdrxoo-GacAxoo調(diào)控系統(tǒng)的鑒定及其對運動性和毒性調(diào)控功能的分析.pdf

1、水水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,簡稱Xoo)引起的白葉枯病是世界水稻生產(chǎn)上最嚴重的細菌病害之一,也是植物一病原物互作研究的重要模式系統(tǒng)之一.近十年來,對Xoo致病相關(guān)基因的研究,大大增加了人們對其致病機理以及與水稻互作分子基礎(chǔ)的認識.雖然已經(jīng)從Xoo中鑒定出了幾十個致病相關(guān)基因,但由于Xoo與水稻之間的互作關(guān)系以及致病機理比較復雜,許多毒性和無毒機制至今仍不清楚,致病相關(guān)基因的表達和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及

2、其機理尚待闡明.對Xoo致病調(diào)控機理的解析,將為發(fā)展新型、有效和可持續(xù)的病害控制策略和方法提供科學依據(jù).最近公布的Xoo全基因組序列,為全面和系統(tǒng)地開展Xoo基因組學研究提供了前所未有的機遇. 為了發(fā)掘Xoo毒性/運動性及其基因表達的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和途徑,本研究以在植物病原細菌普遍存在的雙組分調(diào)控系統(tǒng)(TCS)GacS/GacA為靶標,根據(jù)丁香假單胞番茄致病變種應答調(diào)節(jié)因子GacApst基因序列,搜索 Xoo 全基因組序列,鑒別了該基

3、因的同源序列 gacAxoo.設(shè)計引物gacAF/gacAR,從Xoo基因組中克隆山gacAxoo.序列分析表明,gacAxoo全長 648 bp,編碼215個氨基酸,分子量為23.2 kD,pI為6.76.gacAxoo在黃單胞菌中是保守的.GacAxoo與其他GacA一樣,具有LuxR保守結(jié)構(gòu)域.采用標記置換方法,構(gòu)建了ΔgacAxoo突變體.ΔgacAxoo對水稻的致病性、對非寄主植物煙草的致敏性和胞外酶類產(chǎn)生與野生型菌株相比無明

4、顯差異,但是其運動能力明顯減弱.岡此,gacAxoo基因可能參與了Xoo運動性的調(diào)控. 通過酵母雙雜交(Y2H)技術(shù),以GacAxoo為誘餌蛋白,從Xoo cDNA文庫中篩選出與gacAxoo發(fā)生互作的基岡,其中一個與GacAxoo互作的蛋白Tdrxoo具有TonB-Depedent-Receptor (Tdr)結(jié)構(gòu)域.序列分析表明,Tdrxoo由969個氨基酸組成,1-23個為信號肽,55-167個為plug結(jié)構(gòu)域,608-9

5、69個為 TonB-Dep-Rec結(jié)構(gòu)域.Tdrxoo與細菌外膜蛋白同源,具有接收胞外信號功能的胞外環(huán)和跨膜功能的反向β-折疊桶結(jié)構(gòu).采用插入突變的方法,對tdrxoo基因進行功能分析.與野生型菌株相比,Δtdrxoo致病性喪失,不產(chǎn)生胞外酶和胞外多糖,運動能力減弱,生長受到嚴重抑制,但是仍能引起煙草的HR,生物被膜形成能力增強.因此,推測17drxoo可能位于Xoo細胞外膜,負責接受米自植物或環(huán)境信號的未知信號;tdrxoo的突變可能

6、影響了體外信號的識別或營養(yǎng)成分(如蔗糖)的轉(zhuǎn)運. tdr 基因在黃單胞菌中具有結(jié)構(gòu)保守性.在柑桔潰瘍病菌(Xac306)、甘藍黑腐病菌(Xcc8004和ATCC33913)、辣椒斑點病菌(Xcv85-10)、水稻白葉枯病菌(XooKACC10331)和水稻白葉枯病菌(XooMAFF311018)基囚組中分別存在68、65、64、52、36和36個 tdr 基因.在所分析的226種G<'->細菌中,tdr 基因分布存在差異,27﹪

7、和細菌不具有tdr基因,但是15.5﹪的細菌具有30個以上的脅基因,這些細菌絕大部分屬丁α或γ-變形菌綱或者擬桿菌屬.因此,推測Tdr在這些細菌中可能具有功能保守性. 總之,在Xoo中存在Tdrxoo/GacAxoo調(diào)控途徑,推測Tdrxoo是細胞外膜蛋白,可以識別胞外環(huán)境中的信號,并將信號傳遞至胞內(nèi).Tdrxoo參與凋控了Xoo多種生物學表型的表達,包括致病性、運動性、胞外多糖產(chǎn)生、胞外酶活性、生物被膜形成和細菌生長.此外,位