空腸彎曲菌致GBS動物模型的建立及模式動物體內(nèi)與GBS相關(guān)基因的挖掘.pdf

1、空腸彎曲菌Campylobacterjejuni(CJ)，是人類腸胃炎的最主要的致病菌，臨床約90％的急性細菌腸炎均與該菌相關(guān)。在歐美等國，其致病率已超過沙門氏菌、志賀氏菌、O157大腸桿菌等。CJ除了引起腸炎之外它還是是吉蘭-巴雷綜合征Guillain-Barresyndrome(GBS)的主要誘因之一，有報道指出，在CJ感染之后人類GBS的發(fā)病率會提升100倍。GBS又稱急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(AIDP)，是神經(jīng)系統(tǒng)由體液和

2、細胞共同介導(dǎo)的單向性自身免疫性周圍神經(jīng)病，死亡率約5～10％。鑒于CJ極高的感染率以及后續(xù)的潛在威脅，已受到人們的密切關(guān)注。本研究利用巴馬小型豬構(gòu)建空腸彎曲菌誘導(dǎo)GBS的動物模型，挖掘GBS模式動物中與病發(fā)相關(guān)的基因。
　　 1、空腸彎曲菌致GBS動物模型的建立
　　 選取致人GBS源空腸彎曲菌株，采用3×1012cfu/ml、3×1011cfu/ml、3×1010cfu/ml、3×109cfu/ml等濃度對4組巴馬小型

3、豬灌胃攻毒，每頭豬攻毒10ml，同時設(shè)立對照組。從第二周開始定期采集組織樣及血液樣本，通過免疫學(xué)檢測及組織病理切片判定病變情況。免疫學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，在16份攻毒組樣品中有12份血清中GM1-IgG抗體為檢測陽性，陽性檢出率為81.25％。但是，并沒有顯著的攻毒濃度梯度差異。病理組織切片H/E染色顯示，抗體陽性試驗豬的大腦出現(xiàn)了噬神經(jīng)元、小血管周圍間隙增寬、神經(jīng)中央染色溶解等現(xiàn)象;切片LFB染色顯示，在發(fā)病模型動物的小腦白質(zhì)和腰膨大出現(xiàn)了輕度

4、脫髓鞘現(xiàn)象。結(jié)果表明空腸彎曲菌誘導(dǎo)GBS的濃度在3×109cfu/ml～3×1012cfu/ml均可，組織樣本及血液采集在攻毒后4～5周較理想。
　　 2、空腸彎曲菌致GBS病發(fā)時宿主體內(nèi)相關(guān)基因的研究
　　 根據(jù)病理組織切片和免疫學(xué)檢測結(jié)果，選取典型發(fā)病樣本和對照組樣本的神經(jīng)組織。通過豬全基因組表達譜芯片檢測得到差異探針2156個(P＜0.05)，其中上調(diào)差異探針896條，下調(diào)差異探針1260條，這些探針涉及到的基因共

5、222個，其中上調(diào)基因114個，下調(diào)基因108個?；贕eneOntology數(shù)據(jù)庫對222個差異基因進行分析，得到顯著基因功能(GO)130個(P＜0.05)，其中上調(diào)基因顯著性GO55個，下調(diào)基因顯著性GO75個;基于KEGG數(shù)據(jù)庫，分析所有差異基因參與的信號通路(Pathway)，得到相關(guān)Pathway共127項，其中上調(diào)基因相關(guān)的顯著性Pathway30項，下調(diào)基因相關(guān)的顯著性Pathway37項;采用顯著性GO內(nèi)所含的基因與顯