人源性細(xì)胞動物體內(nèi)移植的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 人源性細(xì)胞大鼠肝內(nèi)移植的實(shí)驗(yàn)研究 材料與方法:建立SD大鼠2-AAF+CCL<,4>+CP大鼠肝再生模型,經(jīng)門靜脈移植人骨髓源性MSCs和CL-1細(xì)胞.移植后每日持續(xù)給予環(huán)孢素A皮下注射(3.Smg/kg)抑制排斥反應(yīng).比較大鼠在處理過程中肝功能(ALT,TBiL)的變化,通過免疫組化、PCR、實(shí)時熒光定量RT-PCR的方法檢測大鼠肝臟中人肝細(xì)胞的存在以及計算所占的比例.結(jié)果與討論:移植人骨髓源性MSCs和CL-1細(xì)胞的大鼠肝

2、功能明顯好轉(zhuǎn)(P<0.01=,但在觀察期內(nèi)未達(dá)到正常水平(P<0.01=,未移植大鼠全部死亡.免疫組化以及PCR檢測顯示移植后大鼠肝臟中存在人源性細(xì)胞;實(shí)時熒光定量RT-PCR顯示移植人骨髓源性MSCs的大鼠肝臟中人肝細(xì)胞的比例分別為9.79％(14天)和9.09%(28天),移植CL-1細(xì)胞的大鼠肝臟中人肝細(xì)胞的比例分別為9.27%(14天)和8.86%(28天)結(jié)論人骨髓源性MSCs和CL-1細(xì)胞可以在2-AAF+CCL<,4>+C

3、p大鼠肝臟內(nèi)存活;人骨髓源性MSCs可以在2-AAF+CCL<,4>+Cp選擇性肝再生大鼠肝臟內(nèi)誘導(dǎo)分化為肝樣細(xì)胞并實(shí)現(xiàn)部分替代(9.79%);人CL-1細(xì)胞可以在大鼠肝臟內(nèi)存活并能部分替代(9.27%);肝內(nèi)移植人骨髓MSCs和CL-1細(xì)胞均有助于2-AAF+CCL<,4>+CP大鼠肝損傷后肝功能的恢復(fù);在觀察期限內(nèi),人CL-1細(xì)胞在免疫抑制的2-AAF+CCL<,4>+CP大鼠肝臟內(nèi)未發(fā)現(xiàn)腫瘤形成.第二部分 人CL-1細(xì)胞裸鼠體內(nèi)致

4、瘤性的實(shí)驗(yàn)研究 材料與方法:將體外培養(yǎng)的CL-1細(xì)胞接種到裸鼠皮下(n=12),觀察其致瘤性,4w后切取種植瘤、肝肺腦進(jìn)行病理檢查,接種1640作陰性對照.結(jié)果與討論:前3周瘤體生長緩慢,后生長加快;接種后4周,總致瘤率為58%(7/12),對照組裸鼠皮下未見種植瘤生長;種植瘤大體標(biāo)本示:瘤體呈光滑的圓球型,界限清楚,有完整包膜,瘤體直徑為(8.26±1.49)mm.鏡下CL-1種植瘤顯示:細(xì)胞形態(tài)大小比較均一,細(xì)胞核深染,核仁不明顯,