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文檔簡介
1、目的:
梗阻性黃疸(Obstructive jaundice,OJ)一旦發(fā)生后可導(dǎo)致機(jī)體、肝、腎等器官及組織相對應(yīng)的病理生理改變,其中影響最大和最嚴(yán)重的損傷為對肝細(xì)胞的損傷,其損傷主要由炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激兩方面造成,由毒素血癥等原因引發(fā)的炎癥反應(yīng)所造成的肝細(xì)胞損傷而最終導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡的機(jī)制及過程已被人們廣泛的研究。隨著近年來人們對梗阻性黃疸發(fā)生后機(jī)體氧化應(yīng)激所造成的肝細(xì)胞損傷的研究的逐漸深入,我們對其認(rèn)識也開始清晰,但目前對氧
2、化機(jī)體氧化應(yīng)激所引起的肝細(xì)胞的損傷仍缺乏有效的治療手段。本實(shí)驗(yàn)通過SD大鼠建立OJ模型,應(yīng)用拉扎堿類藥物(U74389G)對大鼠進(jìn)行干預(yù)治療,通過觀察大鼠肝細(xì)胞中MDA及SOD含量變化、肝細(xì)胞病理及肝功能等各項(xiàng)指標(biāo)的改變。探討拉扎堿類藥物(U74389G)對OJ肝細(xì)胞保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制。
方法:
1.實(shí)驗(yàn)動物分組:將36只S-D雌性大鼠,體重200g~250g隨機(jī)分為四組每組9只:(1)正常組(N組),(2)假手術(shù)組
3、(SO組),(3)陽性對照組:膽總管結(jié)扎組(BDL組),(4)實(shí)驗(yàn)組:膽總管結(jié)扎+U74389G組8mg/kg(BDL+ U74389G組)。
2.動物模型制作:(1)正常組不手術(shù)(2) SO組開腹后單純游離膽管不予結(jié)扎;(3) BDL組開腹后游離出膽總管,于十二指腸上段雙重結(jié)扎并離斷膽總管,術(shù)后6小時開始進(jìn)食;(4) BDL+U74389G組開腹后游離出膽總管,雙重結(jié)扎并離斷膽總管,術(shù)后6小時開始進(jìn)食,術(shù)后第5天始按實(shí)驗(yàn)組8
4、mg/kg劑量腹腔注射U74389G,每天一次,連續(xù)腹腔注射7天。N組,SO組,BDL組等對照組每天腹腔內(nèi)注射同等劑量的生理鹽水。
3.檢測方法和觀察內(nèi)容:術(shù)后第12天處死大鼠,于每只大鼠下腔靜脈抽血,并迅速切取左葉新鮮肝組織,制備標(biāo)本后保存。(1)肝組織蘇木素-伊紅染色觀察肝臟組織病理變化情況。(2)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBL),用自動生化儀測量。(3)檢測大鼠肝細(xì)胞中勻漿中MDA、SO
5、D的含量,用硫代巴比妥酸(TBA)法測定肝組織MDA含量,以黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力。(4)觀察各組大鼠的尿液、皮膚、糞便及肝臟顏色的改變。
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有檢測結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,用SPSS11.5進(jìn)行單因素方差分析t檢驗(yàn),P<0.05即認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01有顯著性差異。
結(jié)果:
1.大鼠的一般情況:
(1)正常組(N組):大鼠皮膚尿液顏色無改變,糞便顏色正常
6、,對疼痛刺激反應(yīng)無明顯變化。
(2)假手術(shù)組(SO組):大鼠皮膚、尿液顏色無改變,糞便顏色正常,對疼痛刺激反應(yīng)靈敏。
(3)陽性對照組(BDL組):皮膚、尿液顏色呈深黃色,糞便顏色部分呈陶土樣,對疼痛刺激反應(yīng)遲鈍。
(4)實(shí)驗(yàn)組(BDL+U74389G組):皮膚、尿液顏色呈深黃色,糞便顏色部分呈陶土樣,對疼痛刺激反應(yīng)遲鈍,與BDL組比較無明顯變化。
2.肉眼觀察及光鏡下觀察HE染色結(jié)果:
7、 (1)N組:開腹后有少量腹水,肝臟顏色紅潤,被膜光滑,與周圍組織無粘連,表面光澤,質(zhì)地柔軟,膽總管未見擴(kuò)張,光鏡下肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,無炎性細(xì)胞浸潤,細(xì)胞無腫脹、變性和壞死,肝細(xì)胞索排列整齊。
(2) SO組:開腹可見有少量清亮腹水,肝臟顏色紅潤無腫脹,被膜光滑,與周圍組織無粘連,表面有光澤,質(zhì)地柔軟,膽管未見擴(kuò)張;光鏡下觀察肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,無炎性細(xì)胞浸潤,細(xì)胞無明顯腫脹、變性和壞死,肝細(xì)胞索排列整齊。
(3) B
8、DL組:開腹后有較多黃色腹水,肝臟顏色深黃,明顯腫脹,且呈不同程度的淤膽狀,表面無色澤差,近肝側(cè)膽管呈囊樣擴(kuò)張瘀膽明顯,直徑約0.3~0.6cm不等的擴(kuò)張,少數(shù)動物肝被膜可見散在的白色膿苔,與周圍組織粘連;光鏡下觀察肝臟組織表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹變大、空泡變性、壞死面積較大,并伴有大量炎性細(xì)胞浸潤,纖維組織及小膽管廣泛增生,部分肝組織增生也較明顯,結(jié)構(gòu)紊亂呈現(xiàn)出肝硬化特征。
(4) BDL+U74389G組:開腹后見少量淺黃色腹水,
9、肝臟顏色淡黃色,輕度腫脹,近側(cè)膽管仍有囊樣擴(kuò)張并伴有膽汁淤積,近肝側(cè)膽管呈直徑約0.3~0.4cm不等的擴(kuò)張,少量動物肝被膜可見散在白色膿苔,與周圍組織輕度粘連;光鏡下觀察肝臟組織見部分動物肝細(xì)胞有輕度濁腫、空泡變性等病理改變。大部分動物僅見肝細(xì)胞出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死和少量纖維組織增生、匯管區(qū)結(jié)構(gòu)可分辨,與BDL組比較肝臟病理損害程度有明顯改善。
3.各組大鼠血清ALT、AST、TBIL的變化
3.1 ALT BDL組、BD
10、L+U74389G組較正常組(N組),假手術(shù)組(SO組)血清ALT均有不同程度升高,其中BDL組與N組及SO組比較有顯著差異(P<0.01),BDL組與BDL+U74389G組比較有顯著差異(P<0.05)。
3.2 AST BDL組、BDL+U74389G組較正常組(N組)及假手術(shù)組(SO組)血清AST均有不同程度升高,其中BDL組與N組及SO組比較有顯著差異(P<0.01),BDL組與BDL+U74389G組比較有顯著差異
11、(P<0.05)。
3.3 TBIL BDL組、BDL+U74389G組較正常組(N組)及假手術(shù)組(SO組)血清TBIL均有不同程度升高,以BDL組最明顯,其中BDL組與N組及SO組比較有顯著差異(P<0.01),BDL組與BDL+U74389G組比較有顯著差異(P<0.05)。
4.肝細(xì)胞中MDA、SOD變化
4.1 MDA BDL組與N組及SO組比較MDA含量明顯增加(P<0.01);經(jīng)U74389G治
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