藍紫色矮牽牛色素基因F3’5’H和DFR的克隆與植物轉化.pdf

1、目的：自然界中的花色種類繁多,但是一些重要花卉都缺少藍色花品種,所以花色改良的研究工作-直是育種工作的重要目標之一。在花色素苷代謝途徑中,類黃酮3'5'羥基化酶F3'5'H是形成藍色花最關鍵的酶,能使花色素的合成趨向于藍色的飛燕草色素；二氫黃酮醇-4-還原酶DFR能特異地催化二氫黃酮醇還原成無色的花色素,對花色素苷的最終形成起決定性作用。F3'5'H基因作為藍色基因的重要組成部分之一,研究F3'5'H基因的表達可為今后利用基因工程技術改

2、良花色研究奠定基礎。 方法：本實驗從藍紫色矮牽牛的花瓣中提取總RNA,利用RT-PCR技術進行F3'5'H cDNA片段和DFR cDNA片段的克隆。分別將F3'5'H基因和DFR基因連接到含有35S啟動子的植物表達載體pBI-121上,成功構建植物表載體pBI-F3'5'H及pBI-DFR,并用農(nóng)桿菌介導法對粉紅色品系矮牽牛進行了F3'5'H基因的遺傳轉化。 結果：測序結果分析表明,克隆得到的F3'5'H基因的序列與N

3、CBI登錄的cDNA序列(D14588)相似性達到99.34％,開放讀碼框為1521bp,編碼506個氨基酸。根據(jù)F3'5'H cDNA的測序結果推算氨基酸序列,并與NCBI登錄的氨基酸序列進行分析比較,發(fā)現(xiàn)推算的氨基酸序列與已報道的存在2個氨基酸差異,氨基酸同源率為99.6％。DFR基因的編碼框長度為1143 bp,與NCBI登錄的cDNA序列(X15537)相似性為99.39％,編碼380個氨基酸。根據(jù)DFR cDNA的測序結果推算

4、氨基酸序列,與NCBI登錄的氨基酸序列進行分析比較,推算的氨基酸序列與已報道序列相似性達到100％。 實驗利用轉基因技術將F3'5'H基因轉化到粉紅矮牽牛中,通過對轉化植株進行PCR及RT-PCR鑒定,確定已獲得轉基因植株,下一步將在此基礎上進一步研究F3'5'H基因?qū)ㄉ挠绊?以期得到花色變異植株。 結論：本論文已從矮牽牛中成功克隆了花色素苷代謝途徑中編碼兩個關鍵性酶的F3'5'H和DFR基因,構建了植物表達載體pB