高溫脅迫下平菇蛋白組學研究及抗性分析.pdf

1、平菇是我國廣泛栽培的食用菌，其營養(yǎng)價值和藥用價值深受廣大消費者青睞。但在園藝設施條件下生產(chǎn)平菇，時常遭遇高溫的突襲，導致菌絲活力下降，易遭遇木霉侵染，出菇推遲甚至嚴重減產(chǎn)，因此高溫是阻礙平菇生長和發(fā)育的主要因素之一。蛋白質(zhì)組學作為功能基因組學研究的重要組分及生命生理機制研究的重要技術(shù)，已成功運用到食用菌各種機制的研究中。
　　高溫脅迫下平菇菌絲的響應途徑、耐熱性機理以及易遭木霉侵染等問題還尚不明確，因此本研究進行了高溫脅迫條件優(yōu)化

2、、蛋白質(zhì)差異表達和木霉侵染率的研究，旨在揭示高溫脅迫響應機制，為選育具優(yōu)良農(nóng)藝性狀的耐性品種提供理論基礎。結(jié)果如下:
　　(1)以糙皮側(cè)耳（P.ostreatus）CCMSSC00389，CCMSSC00374;白黃側(cè)耳(P.cornucopiae)CCMSSC03989, CCMSSC00358, CCMSSC00329, CCMSSC00406, CCMSSC00360, CMSSC00798, CCMSSC00324, CC

3、MSSC00502,CCMSSC00454等11株菌株為材料，以硫代巴比妥酸反應產(chǎn)物(TBARS)含量和生長恢復率為主要生理指標，確定菌齡3d、最適溫度+12℃高溫脅迫處理48h為最優(yōu)高溫脅迫條件;
　　(2)利用iTRAQ結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)分析不同處理下(40℃高溫脅迫48h菌絲和對照、高溫脅迫恢復生長3d菌絲和對照)糙皮側(cè)耳CCMSSC00389蛋白質(zhì)的差異表達，共鑒定到686種蛋白質(zhì)，204個蛋白質(zhì)有顯著性差異，其中共

4、同表達的47個，單獨對應熱激和恢復表達的分別是84個和73個;GO分析表明，差異蛋白可分為23個功能分類，熱脅迫中起主導作用的為蛋白調(diào)控、應激反應、運輸途徑等功能，亞細胞定位分析得出起主導作用的蛋白主要分布在線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、分泌途徑及過氧物酶體中;
　　(3)通過熒光定量RT-PCR驗證了四個熱激蛋白家族基因的轉(zhuǎn)錄情況，hsp60、grp78、hsp90、hsp104經(jīng)過40℃高溫脅迫處理48h后分別上調(diào)28倍、6倍、10倍、15

5、倍，恢復培養(yǎng)3d后基因轉(zhuǎn)錄表達量與對照無顯著性差異，表明HSPs表達量的增加主要由Hsps基因在高溫脅迫下轉(zhuǎn)錄表達量顯著上調(diào)引起的，對菌絲抗高溫脅迫起到重要作用;
　　(4)11個平菇菌株對木霉抗性具有一定的差異，對峙培養(yǎng)7d后CCMSSC00360，CCMSSC00324，CCMSSC00329侵染率低于60％，對木霉表現(xiàn)出一定的抗性，CCMSSC03989和CCMSSC00406受侵染面積達100％，不具抗木霉性;糙皮側(cè)耳CC