低碘膳食對大鼠腦組織中同源盒基因Nkxs表達及細胞凋亡的影響.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分：低碘膳食對大鼠腦組織中同源盒基因Nkxs表達的影響 為探討甲狀腺功能低下對大鼠腦組織中同源盒基因Nkxs表達的影響，本文復制了胚胎期和生后發(fā)育臨界期碘缺乏致甲低的大鼠模型，取孕16天、新生及20日齡仔鼠為實驗動物，(分別相當于人胚胎發(fā)育的早、中、晚期)利用熒光實時定量PCR技術(shù)檢測正常及低碘仔鼠腦組織中Nkxs表達水平。發(fā)現(xiàn)隨著年齡增長，Nkx-2.1表達水平迅速下降，各年齡段表達水平差別有

2、統(tǒng)計學意義；各年齡組低碘及正常大鼠表達水平差別有統(tǒng)計學意義，孕16天正常大鼠Nkx-2.1表達水平明顯高于低碘大鼠，而新生及20日齡低碘大鼠卻明顯高于正常大鼠。正常大鼠,Nkx-2.2在新生期表達水平最低；低碘大鼠隨年齡增長表達水平迅速增高，各年齡組表達水平差別有統(tǒng)計學意義。Nkx-6.1在孕16天表達水平最高，低碘及正常大鼠表達水平差別有統(tǒng)計學意義，新生期、20日齡低碘及正常大鼠表達水平差別有統(tǒng)計學意義；各年齡段正常大鼠表達水平差別有

3、統(tǒng)計學意義；低碘大鼠在孕16天與新生、20日齡表達水平差別有統(tǒng)計學意義，而新生與20日齡之間表達差別無統(tǒng)計學意義。Nkx-6.2在孕16天及新生期表達水平都很低，20日齡表達水平明顯高于前兩組育期；孕16天、20日齡低碘與正常大鼠表達水平差別有統(tǒng)計學意義，新生期低碘與正常大鼠表達水平差別無統(tǒng)計學意義。 結(jié)果表明：甲狀腺激素與同源盒基因Nkx之間確實存在相關(guān)關(guān)系，其相關(guān)性在孕16天胎鼠中就已表現(xiàn)出來，而此時胎鼠的甲狀腺組織尚未發(fā)育

4、成熟，提示母鼠甲狀腺激素對胎鼠發(fā)育的重要作用。 第二部分：甲狀腺激素對原代培養(yǎng)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞Nkxs表達水平的影響 為了解THs對大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞Nkxs基因表達的刺激作用，本文利用正常Wistar大鼠腦組織的原代神經(jīng)膠質(zhì)細胞為研究對象，加入一定劑量的THs(T<,3>和T<,4>)，在給藥后0、12、24、48和72小時分別收獲細胞，利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測細胞中Nkxs各亞型mRNA水平，動態(tài)觀察THs對Nk

5、xs表達水平的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)在0h、12h、24h10<'-8>M T<,3>對神經(jīng)膠質(zhì)細胞Nkx-2.1表達量無明顯刺激作用，48h在T<,3>刺激作用下Nkx-2.1表達量明顯低于對照組，72h其表達量反饋性增高，明顯高于對照組；在T<,4>刺激作用下，Nkx-2.1表達量在12h、24h、48h都明顯低于對照組，72h其表達量也反饋l生增高。Nkx-2.2在T3刺激12h后，其表達量明顯低于對照組，24h后，其表達量明顯

6、高于對照組，48h后其表達量逐漸下降，72h后，其表達量又反饋性增高，與對照組比較差別有統(tǒng)計學意義；T<,4>對于神經(jīng)膠質(zhì)細胞中Nkx-2.2表達的刺激作用在0h、12h、24h、72h與T<,3>刺激作用相似，在48h對Nkx-2.2表達的下調(diào)作用比T<,3>作用更明顯。Nkx-6.1在12h、24h對于在T<,3>、T<,4>刺激作用下都有明顯的下調(diào)作用，其表達量都明顯低于對照組，48時在T<,3>、T<,4>刺激作用下，其表達量都

7、反饋性增高，都明顯高于對照組，T<,3>的上調(diào)作用要高于T<,4>作用，而72h T<,4>刺激作用明顯增高，其表達量明顯高于對照組及T<,3>作用組。Nkx-6.2在T<,3>、T<,4>刺激作用12h后其表達量高于對照組，24h、48h后其表達量逐漸下調(diào)，T<,3>、T<,4>刺激作用72h后，其表達量都明顯高于對照組。結(jié)果表明：THs對于大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞中Nkxs各亞型都有不同程度的刺激作用，但這種作用趨勢不是很明顯，可能與低激素

8、血清作用時間過短以及細胞收獲時間點的選擇有關(guān)。此外T<,4>不僅僅是一種激素原，其刺激作用有時也明顯高于T<,3>刺激作用。 第三部分：低碘膳食對大鼠腦組織細胞凋亡的影響 為了解正常和碘缺乏大鼠腦組織細胞凋亡是否存在差異，本文利用已經(jīng)復制好的低碘及正常大鼠腦組織制作冰凍切片，采用原位細胞凋亡檢測試劑盒(Tunnel試劑盒)檢測新生期低碘及正常大鼠腦組織細胞凋亡情況。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，新生期低碘與正常大鼠腦組織細胞凋亡差