水通道蛋白3和水通道蛋白9在功能性便秘結(jié)腸粘膜的表達(dá)及意義.pdf

1、功能性便秘(functional constipation，F(xiàn)C)是臨床上常見的消化道病癥，其診治已引起了廣泛關(guān)注。從早期認(rèn)為便秘是腸道的功能性改變到發(fā)現(xiàn)一系列實(shí)質(zhì)性損害；從胃腸激素、神經(jīng)遞質(zhì)、腸神經(jīng)系統(tǒng)到cajal起搏細(xì)胞等對(duì)便秘病因病理的研究；從瀉劑濫用到目前我國(guó)《慢性便秘的診治指南》出臺(tái)；從單純內(nèi)科保守治療到外科手段的干預(yù)，我國(guó)便秘的臨床診治水平和基礎(chǔ)研究都在不斷提高。但目前對(duì)功能性便秘病因病理及臨床分型方面的認(rèn)識(shí)以及診治規(guī)范方面

2、尚存在明顯不足；國(guó)內(nèi)少見從大腸的水分吸收和粘液分泌等生理功能變化的角度來(lái)研究便秘的發(fā)生發(fā)展，缺乏對(duì)大腸內(nèi)水通道蛋白(AQP，aqtJaporin)表達(dá)情況的系統(tǒng)性認(rèn)識(shí)及相關(guān)的基礎(chǔ)研究。鑒于此，我們通過研究功能性便秘病人和對(duì)照組結(jié)腸黏膜水通道蛋白3(aquaporin，AQP3)和水通道蛋白9(aquaporin，AQP9)在結(jié)腸粘膜的表達(dá)與分布情況，以探討其與功能性便秘發(fā)生發(fā)展關(guān)系，為功能性便秘的診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。 方法:

3、本實(shí)驗(yàn)首先選取了45例功能性便秘患者(試驗(yàn)組)和32例非便秘患者(對(duì)照組)，分別取其左右結(jié)腸標(biāo)本。先用免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry，IHC)檢測(cè)左右半結(jié)腸粘膜AQP3和AQP9的分布和表達(dá)情況；然后用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)(Western bloting，wB)半定量檢測(cè)AQP3和AQP9，以β-actin作內(nèi)參蛋白，把染色后的硝酸纖維膜輸入真彩生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，檢測(cè)每例AQP3和AQP9條帶灰度值，并分別與相

4、應(yīng)β-actin灰度值相比，將灰度值之比看作受試對(duì)象的AQP3和AQP9的相對(duì)含量，兩者與相應(yīng)β-actin灰度值之比即為AQP3和AQP9的相對(duì)含量，數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)檢驗(yàn)呈正態(tài)分布，采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05。 結(jié)果:1．結(jié)腸近端和遠(yuǎn)端均有AQP3和AQP9表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞， AQP3陽(yáng)性細(xì)胞主要位于結(jié)腸黏膜的項(xiàng)部，而以絨毛上皮細(xì)胞為主，杯狀細(xì)胞少見陽(yáng)性染色，陽(yáng)性細(xì)胞著色主要位于細(xì)胞膜，并以基底側(cè)和腔面為主；AQ

5、P9陽(yáng)性細(xì)胞主要位于結(jié)腸黏膜腔面杯狀細(xì)胞和腺體內(nèi)部分杯狀細(xì)胞，且著色主要位于杯狀細(xì)胞的基底側(cè)。 2.對(duì)照組左半結(jié)腸和右半結(jié)腸AQP3灰度比值分別為0.701±0.013和0.798±0.012，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，試驗(yàn)組左半結(jié)腸和右半結(jié)腸AQP3灰度比值分別為0.697±0.010和0.905±0.017，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。試驗(yàn)組和對(duì)照組右半結(jié)腸差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，左半結(jié)腸統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)無(wú)差異(P>0.05)。 3.對(duì)照組左半結(jié)腸和右半結(jié)腸AQP9灰度比值分別為0.732±0.012和0.543±0.010，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，試驗(yàn)組左半結(jié)腸和右半結(jié)腸AQP9灰度比值分別為0.544±0.01 5和0.545±0.013，兩者相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。試驗(yàn)組和對(duì)照組右半結(jié)腸差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，左半結(jié)腸統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P<0.05)。 結(jié)論: 1.人左右半結(jié)

7、腸均有AQP3和AQP9的表達(dá)。AQP3主要位于右半結(jié)腸絨毛狀上皮細(xì)胞基底側(cè)細(xì)胞膜上，AQP9主要位于左半結(jié)腸粘膜杯狀細(xì)胞基底側(cè)細(xì)胞膜上。這說(shuō)明AQP3與水分的吸收有關(guān)，而AQP9與粘液的分泌有關(guān)。 2.非便秘患者左半結(jié)腸AQP3表達(dá)低于右半結(jié)腸，便秘患者左半結(jié)腸AQP3表達(dá)仍低于右半結(jié)腸。對(duì)于右半結(jié)腸來(lái)說(shuō)，便秘患者結(jié)腸粘膜AQP3表達(dá)增加，而左半結(jié)腸無(wú)明顯差異，這提示水分的吸收主要位于右半結(jié)腸。 3.非便秘患者左半結(jié)腸