奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌相關(guān)毒力因子的研究.pdf

1、本實驗對奶牛乳腺炎陽性和陰性乳汁進行細菌分離，用金黃色葡萄球菌的特異性檢測引物檢測出金黃色葡萄球菌。 金黃色葡萄球菌溶血素是一種外毒素，是其主要毒力因子之一，包括α、β、γ和δ毒素。溶血素對多種哺乳動物紅細胞有溶血作用，并可作用于平滑肌細胞，引起乳腺平滑肌收縮、麻痹，引發(fā)牛的壞疽性乳腺炎。本實驗設(shè)計雙重PCR方法，檢測山東省內(nèi)20多個規(guī)模化奶牛場乳腺炎病例中分離得到的金黃色葡萄球菌，實驗發(fā)現(xiàn)：80％以上的金葡菌存在α溶血素基因，

2、基因片斷長704bp;而β溶血素基因比例為59％，片斷大小為496bp。 檢測金黃色葡萄球菌粘附素基因Fnbp A和Fnbp B，分析奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌臨床分離株纖連蛋白連接蛋白主效基因。利用設(shè)計合成的特異性引物對金黃色葡萄球菌進行PCR擴增，對本實驗室所分離鑒定的金葡菌臨床分離株進行雙重PCR檢測。PCR產(chǎn)物經(jīng)過電泳成像顯示，分別在524bp和642bp處出現(xiàn)特異性條帶。通過對金葡菌臨床分離株雙重PCR檢測發(fā)現(xiàn)：95％以

3、上的金葡菌存在粘附素基因Fnbp A，而Fnbp B基因僅有10％。 血漿凝固酶是檢驗致病性金黃色葡萄球菌的重要指標，它們能使含有抗凝劑的家兔或人的血漿凝固，有助于致病菌抵御宿主體內(nèi)吞噬細胞和殺菌物質(zhì)的作用。依據(jù)金黃色葡萄球菌血漿凝固酶基因序列，設(shè)計合成特異性引物，通過聚合酶鏈式反應(yīng)擴增其基因，并將擴增基因克隆入T載體，進行序列測定，對所分離的奶牛乳腺炎病原菌進行鑒定。結(jié)果顯示：金黃色葡萄球菌擴增出特異性條帶，大小為761bp；

4、其他菌株未出現(xiàn)條帶。 金黃色葡萄球菌Fnbp的抗體不僅可以阻止細菌的黏附，而且還是一種調(diào)理素，可以促進機體對細菌的清除作用。金黃色葡萄球菌的α-溶血素是一種胞外毒素，其類毒素對金黃色葡萄球菌所致的羊乳腺炎有部分保護作用。本實驗利用獲得的基因工程蛋白rFnbp、rα-HL及真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1+-ClfA，混合佐劑免疫實驗小鼠，通過ELISA方法檢測血清中的抗體水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：所有蛋白疫苗免疫實驗小白鼠在首免后所采集的血清