肝腎聯(lián)合移植中移植肝對移植腎的保護(hù)作用及機制的研究.pdf

1、研究目的： 觀察肝腎聯(lián)合移植術(shù)中移植肝對移植腎的保護(hù)作用，并初步探討其可能的機制。 材料與方法： 一、改良式大鼠腎移植模型的建立。 SD大鼠為供受體。供體切取范圍包括左腎、左腎動靜脈、左輸尿管、膀胱、腹主動脈(腹腔動脈以下至左腎動脈下方約0.8cm)、后腔靜脈，后腔靜脈反轉(zhuǎn)固定于自制的Cuff管上。受體動脈重建：受體暴露左腎動脈以后全長腹主動脈，于中點處剪斷，以硬膜外導(dǎo)管作內(nèi)支架，連續(xù)吻合供受體腹主動脈，

2、吻合上口時，硬膜外導(dǎo)管由供體腹主動脈下方開口穿入，上方開口穿出進(jìn)入受體上段腹主動脈；吻合下口時，硬膜外導(dǎo)管由腸系膜前動脈穿出。動脈重建完畢后，拔出硬膜外導(dǎo)管，結(jié)扎腸系膜前動脈。靜脈重建：供體后腔靜脈遠(yuǎn)心端與受體左腎靜脈行端端吻合。輸尿管重建：供體膀胱瓣與受體膀胱全層縫合。 二、大鼠肝腎聯(lián)合移植模型的建立。 SD大鼠為供、受體。自制部分手術(shù)小器械；整塊切取供鼠肝臟、腎；供肝肝上下腔靜脈用顯微外科技術(shù)縫合，雙袖套法吻合腎下下

3、腔靜脈及門靜脈，右腎動脈采用顯微外科技術(shù)與受體腎動脈吻合，用支架管重建膽道和輸尿管。術(shù)后采取復(fù)溫、補液、抗感染等綜合措施。 三、肝腎聯(lián)合移植中移植肝保護(hù)移植腎的實驗研究 實驗分兩組：肝腎聯(lián)合移植組(CLKT)和腎移植組(OKT)，均由Wistar大鼠為供體，雄性SD大鼠為受體。按第一、二部分描述的方法進(jìn)行腎移植和肝腎聯(lián)合移植，術(shù)后第5天取移植腎組織，進(jìn)行HE染色、Masson染色、PAS染色、PASM染色，光鏡下觀察病理

4、改變，參照Banff97標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，根據(jù)Watanabe的方法進(jìn)行急性排斥反應(yīng)嚴(yán)重程度的半定量評分。比較兩組評分的差異。 四、CLKT和OKT組T細(xì)胞亞群的變化比較及其意義。 采用流式細(xì)胞技術(shù)測定CLKT、OKT以及對照組靜脈血T細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共刺激分子CD28、CD152和ICOS的表達(dá)。 五、肝腎聯(lián)合移植perforin、FasLmRNA的表達(dá)及其意義。 OKT組和CLKT組均為7例腎移植。術(shù)

5、后第五天，采取受鼠靜脈血標(biāo)本，采用熒光定量PCR方法perforin、FasLmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果： 一、大鼠腎移植新術(shù)式的效果。 供體手術(shù)時間為42±3min；受體手術(shù)時間為90±10min。供體器官熱缺血時間為≤2s，冷缺血時間≤100min。53例次手術(shù)中，成功48例，手術(shù)成功率為90.6％(48/53)。術(shù)后出現(xiàn)尿漏2例，輸尿管入膀胱處狹窄1例，移植腎靜脈栓塞1例，術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率8.33％(4/4

6、8)。 二、大鼠肝腎聯(lián)合移植模型的建立。 供體手術(shù)時間為38±5min；受體無肝期為19.7±3min；受體手術(shù)時間為81±13min。供體器官熱缺血時間為≤4s，冷缺血時間≤83min；手術(shù)成功率為87.1％(183/210)；術(shù)后門靜脈栓塞等近期并發(fā)癥的發(fā)生率為12.9％(27/210)。 三、肝腎聯(lián)合移植中移植肝保護(hù)移植腎的實驗研究。 CLKT組和OKT移植腎的半定量評分分別為(1.33±0.82)

7、和(4.33±0.82)。兩組評分有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)，OKT組明顯高于CLKT組。 四、CLKT和OKT組T細(xì)胞亞群的變化分析。 CD3+T淋巴細(xì)胞總數(shù)在CLKT、OKT以及Contr組間無明顯差異(P＞0.05)，但CD4+CD3+T淋巴細(xì)胞總數(shù)為OKT組最高，CLKT組其次，Contr組最低，有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。CLKT組和Contr組CD8+CD3+T淋巴細(xì)胞無明顯差異(P＞0.05)，但均顯著

8、低于OKT組(P＜0.05)。三組中CD4+/CD8+比值變化有明顯差異，OKT組最高，CLKT組其次，Contr組最低(P＜0.05)。三組CD28％表達(dá)有顯著差異，OKT組最高，CLKT組其次，Contr組最低(P＜0.05)。三組CD152％有顯著差異，CLKT組最高，OKT組其次，Contr組最低(P＜0.05)。而ICOS的表達(dá)情況跟CD28相似，OKT組最高，CLKT組其次，Contr組最低，均有統(tǒng)計學(xué)意義。 五、肝

9、腎聯(lián)合移植perforin、FasLmRNA的表達(dá)。 OKT組移植腎標(biāo)本中P、FasLmRNA的表達(dá)水平為(50.03±26.04)×106拷貝/ugRNA、(4.35±1.64)×106拷貝/ugRNA，而CLKT組P、FasLmRNA的表達(dá)水平分別達(dá)到(3.41±1.55)×106拷貝/ugRNA和(0.14±0.38)×106拷貝/ugRNA，兩組基因的表達(dá)均有顯著性差異(p＜0.001)，OKT組明顯高于CLKT組。OK

10、T組外周血標(biāo)本中P、FasLmRNA的表達(dá)水平為(500.34±34.06)×106拷貝/ugRNA、(43.54±14.60)×106拷貝/ugRNA，而CLKT組P、FasLmRNA的表達(dá)水平分別達(dá)到(260.38±15.53)×106拷貝/ugRNA和(16.38±3.81)×106拷貝/ugRNA，兩組基因的表達(dá)均有顯著性差異(p＜0.001)，OKT組明顯高于CLKT組。 結(jié)論： 1.本研究建立的大鼠腎移植和肝

11、腎聯(lián)合移植模型，具有操作簡單、對手術(shù)器械和術(shù)者的顯微外科技能要求低、成功率高、并發(fā)癥少等優(yōu)點，是進(jìn)行基礎(chǔ)研究的良好動物模型； 2.肝腎聯(lián)合移植術(shù)中，移植肝臟對移植腎臟有保護(hù)作用，能降低移植腎排斥反應(yīng)的程度； 3.肝腎聯(lián)合移植術(shù)中，T淋巴細(xì)胞的成熟、活化受到抑制，同時抑制了正性共刺激分子CD28和ICOS的表達(dá)，促進(jìn)負(fù)性共刺激分子CD152的表達(dá)，從而達(dá)到保護(hù)移植腎的作用； 4.肝腎聯(lián)合移植術(shù)中，perforin和