氟西汀對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞鈉氫交換體1的影響.pdf

1、目的：
　　 探討氟西汀急慢性處理對(duì)原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)pH值(pHi)的調(diào)節(jié)作用及其由5-HT2B受體介導(dǎo)激活NHE-1的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、穩(wěn)態(tài)pHi檢測10μM氟西汀急性處理(30分鐘)或者慢性處理(1d、3d或7d)的星形膠質(zhì)細(xì)胞,采用熒光探針技術(shù)檢測細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的pHi。
　　 2、酸負(fù)載星形膠質(zhì)細(xì)胞連續(xù)進(jìn)行一次20mMNH4Cl時(shí)間為2分鐘的酸負(fù)載,分別檢測酸恢復(fù)前

2、兩分鐘pHi的變化速率(△pH/△t)。
　　 3、Westernblot和免疫沉淀選取培養(yǎng)于60mm培養(yǎng)皿中的成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞,用10μM氟西汀慢性處理(3d、1w、2w、4w)后,收集細(xì)胞,檢測細(xì)胞內(nèi)NHE1蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1、穩(wěn)態(tài)pHi檢測與對(duì)照組相比,10μM氟西汀急性處理后能引起細(xì)胞穩(wěn)態(tài)pHi顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),持續(xù)10分鐘后恢復(fù)基線水平;與對(duì)照組相比,10μ

3、M氟西汀作用3天和7天均能明顯提高細(xì)胞pHi值～0.4,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而慢性作用1天后的細(xì)胞pHi值無明顯變化;在U0126(MEK選擇性抑制劑)或SB204741(5-HTz8受體選擇性抑制劑)存在的條件下,可以抑制氟西汀急慢性處理后的細(xì)胞pHi的升高。
　　 2、酸負(fù)載與第一次酸恢復(fù)前兩分鐘檢測的△pHi/△t值相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的△pHi/△t值有顯著性的升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。抑制劑組

4、細(xì)胞的△pHi/△t值無明顯變化。
　　 3、Westernblot和免疫沉淀10μMFlu急性作用30秒、1分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、40分鐘和60分鐘,細(xì)胞內(nèi)p-RSK在20分鐘和40分鐘時(shí)明顯升高,60分鐘時(shí)下降。10μMFlu急性作用20分鐘,細(xì)胞內(nèi)p-RSK升高。200nMSB204741(5-HT2B受體抑制劑)部分抑制p-RSK升高,而10μMU0126(MEK抑制劑)可抑制p-RSK升高。10μMFlu急