5-氟尿嘧啶-1-乙酸-α-環(huán)糊精前藥的結腸靶向研究.pdf

1、5-氟尿嘧啶(5-FU)是嘧啶類似物，在細胞內轉化為5-氟尿嘧啶脫氧核苷酸后，而具有抗腫瘤活性，是治療結腸癌的首選化療藥物。但是5-FU的普通口服制劑給藥后吸收不完全，生物利用度低，胃腸道毒副作用大，這些極大的影響了5-FU的臨床應用。5-氟尿嘧啶-1-乙酸(5-FUA)是5-FU的羧基化衍生物，其藥理作用經證實與5-FU相同，具有抗腫瘤作用，但毒副作用相對較小。
　　α-環(huán)糊精(α-CD)在胃腸道中很少被吸收，但是可以被α-淀粉

2、酶和結腸內微生物群落酵解為小分子糖類。本研究擬將5-FUA與α-CD通過酯鍵相連接，制備成前藥5-氟尿嘧啶-1-乙酸-α-環(huán)糊精結合物。前藥在腸道內α-淀粉酶及結腸細菌糖苷酶的相互作用下水解釋放出5-FUA，發(fā)揮前藥的結腸靶向作用。
　　目的:
　　將5-FUA與α-CD通過酯鍵相連接，制備成前藥5-氟尿嘧啶-1-乙酸-α-環(huán)糊精結合物，并進行體外酶溶液的釋放研究和相關動物實驗研究。
　　方法:
　　1根據文獻方

3、法，以α-氯乙酸和5-氟尿嘧啶為原料，在100℃高溫和pH=10的堿性環(huán)境下反應生成5-FUA，分離純化后，測定熔點，并對其進行質譜、紅外和核磁鑒定。
　　2將制備的5-FUA溶解于適量的干燥DMF中，加入縮合劑羰基二咪唑(CDI)，室溫條件下攪拌反應3h。將等摩爾的α-CD溶于干燥的DMF中，滴加到反應液中，繼續(xù)反應48h生成5-氟尿嘧啶-1-乙酸-α-環(huán)糊精結合物，加入丙酮使產物析出。產物經大孔吸附樹脂Diaion-HP20純

4、化后，稱取適量，在強堿條件下水解，采用高效液相色譜法(HPLC)及質譜法(MS)測定結合物的取代度。
　　3對5-氟尿嘧啶-1-乙酸-α-環(huán)糊精結合物進行體外釋放研究:建立HPLC法測定5-FUA的含量，并考察了前藥在α-淀粉酶溶液、羧酸酯酶溶液和兩者混合溶液中的水解行為;考察了前藥pH1.2鹽酸溶液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和pH11硼砂-碳酸鈉緩沖液等不同pH溶液中的水解行為，并繪制了單取代產物的1gK-pH曲線。
　　4

5、將Wistar大鼠胃內容物以pH1.2的鹽酸溶液稀釋10倍，小腸及盲腸內容物以pH6.8的磷酸鹽緩沖液稀釋10倍，濾去不溶性大顆粒，加入定量前藥。建立HPLC法測定藥物含量，在1、2、3、5、8和12h取樣檢測，并繪制前藥的水解曲線。
　　以Wistar大鼠為受試動物，將前藥5-氟尿嘧啶-1-乙酸-α-環(huán)糊精結合物溶于生理鹽水灌胃給藥，于4h、8h、12h和24h時處死大鼠，取胃、小腸和大腸組織及其內容物，冷凍儲藏備用。建立HPL

6、C法分別測定其藥物含量，并繪制相關柱狀圖。
　　結果:
　　1確定的合成工藝為:當5-氟尿嘧啶與α-氯乙酸的反應比例為1∶1.2時，在反應溫度100℃條件下反應6h時，產率最高，為45.4％。所得產物熔點為272C，經質譜、紅外和核磁測定，證明產物為目標化合物5-FUA。
　　2結合物經甲醇-水溶液梯度洗脫，在10％-30％的洗脫液中檢測到結合物。其中，10％洗脫產物中5-FUA占羥基百分比為4.0％，為單取代產物（稱

7、為產物一）;30％洗脫產物中5-FUA占羥基百分比為8.9％，為雙取代產物（稱為產物二）。
　　3建立了HPLC法測定酶溶液中5-FUA的含量，檢測波長為271nm，經方法學驗證，溶劑和其他物質對主藥的檢測無干擾，所用方法準確、靈敏，適用于5-FUA的含量檢測;不同取代度的前藥在α-淀粉酶和羧酸酯酶混合溶液中的水解率高于α-淀粉酶溶液和羧酸酯酶溶液的水解率，且單取代產物水解速率明顯高于二取代產物。由前藥的1gK-pH曲線知，前藥的

8、水解速率隨溶液pH的升高而加快。
　　4動物實驗研究:建立了HPLC法測定胃、小腸和大腸組織及其內容物中藥物濃度，檢測波長為274nm，且空白組織和內容物不干擾主藥的測定。不同取代度的前藥在盲腸內容物溶液中水解率最高，在胃內容物溶液中水解率最低;并且，單取代產物的水解率高于雙取代產物的水解率。與此相對應的是，前藥在大鼠大腸段的藥物釋放量最高，其組織和內容物中藥物含量最高;而在胃部幾乎不釋藥，其組織和內容物中未曾檢測到藥物。