DLL1基因在小鼠B16黑色素瘤形成中的作用研究.pdf

1、Notch信號(hào)通路是進(jìn)化上高度保守的細(xì)胞與細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，通過調(diào)控細(xì)胞的分化、增殖、凋亡的命運(yùn)選擇，在胚胎正常發(fā)育、機(jī)體穩(wěn)態(tài)調(diào)控以及成體干細(xì)胞的維持中發(fā)揮重要作用。在胚胎血管發(fā)育過程中，Notch信號(hào)通路調(diào)控著動(dòng)靜脈血管的分化和血管內(nèi)皮Tip細(xì)胞和Stalk細(xì)胞的命運(yùn)選擇，對(duì)胚胎血管網(wǎng)絡(luò)正常結(jié)構(gòu)和功能的維持起到了關(guān)鍵作用。Notch信號(hào)通路調(diào)控的異常往往由于血管網(wǎng)絡(luò)發(fā)育的缺陷而導(dǎo)致胚胎死亡。在成體生理性新生血管形成中，Notch信

2、號(hào)通路的激活限制了血管的過度生成，維持了機(jī)體的穩(wěn)定。在腫瘤血管中，DLL4的表達(dá)顯著增高，阻斷DLL4激活的Notch信號(hào)通路引起了腫瘤血管的無功能性過度生成，使腫瘤的血流灌注減少而抑制了腫瘤的生長；而過表達(dá)DLL4雖然腫瘤血管的生成，但卻改善了腫瘤血管的結(jié)構(gòu)和灌流功能，促進(jìn)了腫瘤的生長。但與此同時(shí)，也有研究證實(shí)Notch的另一配體Jagged1能通過促進(jìn)腫瘤的功能血管的形成而促進(jìn)腫瘤的生長。
　　鑒于Notch信號(hào)通路的調(diào)控作用

3、環(huán)境依賴性（Context-dependent）和Notch分子間的功能特異性，我們檢測(cè)了另外一個(gè)Notch配體DLL1在腫瘤血管中的作用。DLL1調(diào)控胚胎期動(dòng)靜脈血管的分化和成體損傷后血管的形成。但其在腫瘤血管中的作用還沒有詳細(xì)的研究報(bào)道。我們?cè)贒LL1與腫瘤血管的研究中主要做了以下工作：
　　1、構(gòu)建共表達(dá)DLL1蛋白和綠色熒光蛋白（GFP）的真核表達(dá)質(zhì)粒。通過設(shè)計(jì)特異引物，利用PCR方法擴(kuò)增出DLL1基因片段，測(cè)序正確后連接

4、通過到pIRES2-EGFP質(zhì)粒中；然后對(duì)新構(gòu)建的pIRES2-EGFP-DLL1質(zhì)粒進(jìn)行了酶切鑒定和測(cè)序。
　　2、在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)DLL1的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的體外增殖。通過分別轉(zhuǎn)染pIRES2-EGFP-DLL1質(zhì)粒和pIRES2-EGFP質(zhì)粒，藥物篩選建立了穩(wěn)定表達(dá)DLL1基因和GFP基因的B16黑色素瘤細(xì)胞系；檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DLL1激活了腫瘤細(xì)胞Notch信號(hào)通路；MTT和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)表明DLL1的表達(dá)促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖

5、和克隆的形成。
　　3、觀查到DLL1通過減少腫瘤血管的生成抑制了腫瘤在小鼠體內(nèi)的生長。小鼠皮下荷瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組腫瘤在小鼠體內(nèi)的生長長受到抑制，基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Notch通路在腫瘤中激活，免疫熒光和免疫組化實(shí)驗(yàn)證實(shí)血管腫瘤中血管形成減少，腫瘤組織血供障礙，缺氧程度加重，壞死增加。
　　結(jié)論：綜上所述，我們的研究認(rèn)為DLL1在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)能通過腫瘤細(xì)胞間的相互作用激活HES1、HEY1等Notch下游基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖