D3+CD4+T淋巴細(xì)胞分選的建立及整合素α4β7在腸道表達(dá)的意義.pdf

1、第一章:流式細(xì)胞儀分選外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞方法的建立
　　目的:建立一種準(zhǔn)確快速分離外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞，對細(xì)胞活性干擾少的分選方法。
　　方法:首先用Percoll連續(xù)密度梯度離心法制備外周血單個核細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀分選CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞。分選后的細(xì)胞通過細(xì)胞存活率、細(xì)胞純度鑒定和形態(tài)觀察對分選方法進(jìn)行評價。
　　結(jié)果:Percoll連續(xù)密度梯度離心法能很好的制備外周血單個核細(xì)胞，分

2、選前CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞純度為(51.9±9.6)％，分選后CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞純度為(95.9±0.8)％，差異有顯著性(P＜0.01)。分選后的細(xì)胞存活率為(95.8±1.2)％，細(xì)胞的形態(tài)保持完整。
　　結(jié)論:采用流式細(xì)胞儀分選的CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞純度和存活率高，對形態(tài)影響小并可在無菌條件下進(jìn)行，分選的細(xì)胞可繼續(xù)開展其他功能的研究。
　　第二章:人腸道組織中CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞分選方法的建立<

3、br>　　目的:建立一種準(zhǔn)確且對細(xì)胞活性干擾少的分離人腸道組織中CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞的分選方法。
　　方法:首先用消化酶分解人腸道組織，40μm細(xì)胞濾器過濾獲得細(xì)胞懸液。Percoll連續(xù)密度梯度離心法分離細(xì)胞懸液收集單個核細(xì)胞，然后通過流式細(xì)胞儀分選單個核細(xì)胞中的CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞。分選后的細(xì)胞采用細(xì)胞存活率、細(xì)胞純度和形態(tài)觀察對分選方法進(jìn)行評價。
　　結(jié)果:消化酶能夠很好的分解人腸道組織獲得細(xì)胞懸液，Per

4、coll連續(xù)密度梯度離心法收集的單個核細(xì)胞中CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞純度為(43.9±7.3)％，流式細(xì)胞儀分選后CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞純度為(96.9±1.2)％，差異具有顯著性(P＜0.01)。分選后的細(xì)胞存活率為(97.8±1.6)％，細(xì)胞的形態(tài)保持完整。
　　結(jié)論:Percoll連續(xù)密度梯度離心法聯(lián)合流式細(xì)胞儀分選法(FACS)收集人腸道組織的CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞純度高，且對細(xì)胞形態(tài)和存活率影響小并可在無菌條件

5、下進(jìn)行，分選的細(xì)胞可繼續(xù)用于其他功能的研究。
　　第三章:整合素α4β7在腸道表達(dá)的意義
　　目的:通過對外周血和腸道組織CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞整合素α4β7表達(dá)率的檢測，從分子水平為腸道作為人免疫缺陷病毒感染主要部位提供依據(jù)。
　　方法:采用流式細(xì)胞儀對外周血和腸道組織中CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞整合素α4β7表達(dá)情況進(jìn)行分析，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
　　結(jié)果:外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞整合素α4β