產(chǎn)纖溶酶海洋微生物的篩選鑒定、發(fā)酵產(chǎn)酶、酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、研制高效、安全、價(jià)格低廉的溶血栓藥物一直是醫(yī)藥界研究的熱門。微生物作為溶栓藥物的一個(gè)新來(lái)源，其所產(chǎn)纖溶酶具有分子量小，容易吸收利用，使用安全等特點(diǎn)，非常具有開(kāi)發(fā)價(jià)值。本文從菌種的篩選開(kāi)始，主要完成了以下研究?jī)?nèi)容。
　　 通過(guò)平板初篩、搖瓶復(fù)篩，從采自廣西北海的海泥中篩選出一株高纖溶酶活力的菌株HQS-3。對(duì)該菌株進(jìn)行形態(tài)、生理生化鑒定及16S rDNA序列分析，結(jié)果表明該菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。

2、該菌株產(chǎn)纖溶酶初始酶活高達(dá)1980U/mL，遺傳穩(wěn)定，純化后的纖溶酶并未發(fā)現(xiàn)有溶血現(xiàn)象。
　　 對(duì)菌株HQS-3的產(chǎn)酶條件進(jìn)行研究，菌株HQS-3最佳培養(yǎng)基組成為(w/v)：可溶性淀粉5％，大豆蛋白胨1.5％，CaCl20.02％，KH2PO40.1％，K2HPO40.3％，MgSO47H2O0.35％;最佳發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度31℃，初始發(fā)酵pH為7.5，轉(zhuǎn)速180r/min，接種量4％，種子培養(yǎng)時(shí)間18h，裝液量50mL/2

3、50mL三角瓶，發(fā)酵時(shí)間66h。在此條件下，菌株HQS-3的纖溶酶活力由1980U/mL提高到4380U/mL，提高了1.2倍。
　　 菌株發(fā)酵粗酶液經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀、堿溶液處理、膜分離、離子交換層析和凝膠過(guò)濾層析后，得到電泳純的纖溶酶，分子量約為28KDa，酶活回收率為13％，比酶活達(dá)到62745U/mg。
　　 酶學(xué)性質(zhì)研究顯示菌株HQS-3所產(chǎn)纖溶酶的最適酶促反應(yīng)pH為8.0，在pH6.0～11.0間穩(wěn)定；最適反應(yīng)溫

4、度在45℃到50℃之間，在低于35℃的范圍內(nèi)有較好的穩(wěn)定性，但是溫度高于45℃以后迅速失活。蛋白酶抑制劑PMSF和EDTA對(duì)該纖溶酶都有明顯的抑制作用，表明該纖溶酶為一種絲氨酸蛋白酶，其活性中心依賴于金屬離子。Ca2+、Mg2+均對(duì)酶活力有促進(jìn)作用；Fe3+、Cu2+、Zn2+對(duì)酶活力有著明顯的抑制作用；低濃度的Mn2+對(duì)纖溶酶的酶活力有一定的促進(jìn)作用，而高濃度的Mn2+對(duì)酶的活力有微弱的抑制作用。初步判斷該纖溶酶等電點(diǎn)在9.0至9.2