H3N8亞型馬流感病毒的致病性研究及滅活疫苗的研制.pdf

1、馬流行性感冒是由馬流感病毒(Equine influenza virus,EIV)引起的馬屬動物的一種急性呼吸道傳染病,世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病。目前馬流感病毒分為兩個不同的亞型,分別是H7N7亞型病毒和H3N8亞型病毒,由這兩個亞型引起的馬流感廣泛分布于世界各地。近30年來,世界各國所暴發(fā)的馬流感均由H3N8亞型馬流感病毒所引起。H3N8亞型馬流感的頻繁暴發(fā),對養(yǎng)馬業(yè),尤其是賽馬業(yè)危害嚴重,已在世界范圍內(nèi)造成

2、了巨大的經(jīng)濟損失。
　　 2007年,許多國家包括澳大利亞、日本等暴發(fā)了馬流感疫情,我國新疆以及華北地區(qū)也暴發(fā)了類似馬流感的疫情,在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上,我們從華北地區(qū)分離到了一株H3N8亞型馬流感病毒。本研究在病毒分離鑒定的基礎(chǔ)上,為進一步探討馬流感病毒的致病機理,馬流感病毒跨種間傳播的可能性以及疫苗對馬流感的預(yù)防效果,開展了如下研究工作。
　　 (1)對2007年華北地區(qū)馬群中暴發(fā)的H3N8亞型馬流感病毒進行了分離鑒

3、定；測定了不同代次的雞胚傳代病毒對馬致病性和致病性差異分子機制的探討與分析。
　　 從發(fā)病賽馬中分離到1株H3N8亞型馬流感病毒,分離毒株為低致病性流感病毒,屬于美洲譜系病毒,為馬源H3N8亞型流感病毒流行毒株,命名為A/Equine/Huabei/1/07(H3N8)。
　　 利用F2代分離病毒,采用噴霧的方式以約5×106.7EID50/匹的劑量感染12個月～20個月齡的馬,建立起以持續(xù)性發(fā)燒和流水樣鼻汁為主要癥狀的

4、馬流感發(fā)病模型。F3、F4、F5和F10代病毒對馬的致病性逐漸減弱,不能用于發(fā)病模型的建立。
　　 采用RT-PCR和基因序列測定技術(shù),成功地獲得F2、F3、F4、F5和F10代毒株的基因組序列。F2代～F5代毒株之間HA基因的核苷酸和氨基酸的同源率均為100％,而F2代～F5與F10代核苷酸的同源率均為99.90％,氨基酸的同源率均為99.80％；變異位點在核苷酸第539位,在此位點上F2代～F5代毒株核苷酸序列為A(腺嘌呤)

5、,而F10代毒株為G(鳥嘌呤),這一核苷酸位點的變異導(dǎo)致氨基酸159位(閱讀框176位)抗原位點的氨基酸發(fā)生改變,由F2代～F5代毒株的N(天冬酰胺)變?yōu)镕10代毒株的酸性氨基酸D(天冬氨酸)。HA基因的變異初步解釋了毒株致病性減弱的主要分子機制。
　　 (2)H3N8亞型馬流感病毒分離毒株對不同品種犬的感染性研究,對馬流感病毒的跨種間傳播提供了試驗數(shù)據(jù)；
　　 用分離的A/Equine/Huabei/1/07(H3N8

6、)毒株,經(jīng)滴鼻感染途徑分別以1.0mL或2.0mL(106.7EID50/條或2×106.7EID50/條)的接種劑量人工感染靈緹犬和比格犬。結(jié)果表明試驗用H3N8亞型馬流感病毒僅能引起犬輕度的上呼吸道病變,多數(shù)感染犬排毒且血清學(xué)檢測抗體陽轉(zhuǎn),但感染犬無異常臨床癥狀。此研究證實目前我國分離的馬源H3N8亞型流感病毒能夠感染犬,但可能暫時不會對犬類的健康構(gòu)成威脅。
　　 (3)利用分離的H3N8亞型馬流感病毒流行毒株,初步研制成功