聚丙烯酰胺凝膠上DNA銀染方法的研究.pdf

1、目的：
　　 1．研究開發(fā)親環(huán)境、靈敏、快速的DNA銀染方法；
　　 2．為分子生物學研究人員提供便捷的DNA銀染方法。
　　 方法：
　　 選用葡萄糖、維生素C等親環(huán)境銀離子還原劑，考察影響銀染效果的各個因素，如銀染液的組成、固定時間、顯影時間、水洗時間、顯影液組分的影響，建立親環(huán)境、靈敏、快速的DNA銀染方法。
　　 結(jié)果：
　　 1．優(yōu)化了傳統(tǒng)的DNA銀氨染色法，靈敏度達1.5-3p

2、g/band，消除了戊二醛、鉻等有毒增敏劑的使用，靈敏度高于傳統(tǒng)的DNA銀氨染色法近30倍，操作時間由22h縮減到40min，其操作步驟如下：
　　 (1)水洗：電泳后，凝膠用去離子水水洗10min:
　　 (2)銀染：凝膠放入50mL銀氨染色液中染色5min，銀氨染色液的組分為0.2％AgNO3,0.7％NH4OH,0.4％NaOH:
　　 (3)水洗：凝膠用去離子水中水洗2min:
　　 (4)顯影：

3、凝膠在50mL顯影液中顯影4-6min，顯影液的組分為0.01％檸檬酸，0.005％HCHO;
　　 (5)終止：凝膠放入5％醋酸(HAc)中2min終止顯影．
　　 2．用親環(huán)境的銀離子還原劑葡萄糖取代DNA銀染中的有毒銀離子還原劑甲醛，建立了親環(huán)境的DNA葡萄糖-銀染方法，靈敏度達5-10pg/band.
　　 (1)固定：電泳后，凝膠在7.5％HAc中固定10min;
　　 (2)水洗：凝膠用去離子

4、水水洗3次，每次5min;
　　 (3)銀染：凝膠放入50mL銀染液中染色5min，染色液的組分為0.2％AgNO3;
　　 (4)水洗：凝膠在去離子水中水洗2次，每次20s；
　　 (5)顯影：凝膠在50mL顯影液中顯影4-8min，顯影液的組分為8％葡萄糖，100mM硼酸，250mMNaOH;
　　 (6)終止：凝膠放入1.5％EDTA中5min終止顯影．
　　 3．用親環(huán)境的銀離子還原劑維生

5、素C取代DNA銀染中的有毒銀離子還原劑甲醛，建立了親環(huán)境的DNA維生素C-銀染方法，靈敏度達10pg/band.
　　 (1)水洗：電泳后，凝膠用去離子水水洗10min:
　　 (2)銀染：凝膠放入50mL銀氨染色液中染色5min，銀氨染色液的組分為0.2％AgNO3,0.7％NH4OH,0.4％NaOH;
　　 (3)水洗：凝膠用去離子水中水洗2次，每次30s；
　　 (4)顯影：凝膠在50mL顯影液中