茶樹(shù)CBF基因的克隆與功能分析.pdf

1、低溫脅迫嚴(yán)重影響著植物的生長(zhǎng)發(fā)育。為了抵御低溫的危害，植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成了一套適應(yīng)和抗寒機(jī)制，隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，許多冷誘導(dǎo)基因在不同的植物被分離出來(lái)，植物抗寒機(jī)制的研究也更加深入。CBF是一類與低溫脅迫相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，它能夠與COR基因啟動(dòng)予中的CRT/DRE元件特異地結(jié)合，激活COR基因的表達(dá)，提高植物的抗寒性。因此，CBF類轉(zhuǎn)錄因子能夠綜合地改良植物的抗寒性狀，是目前比較理想的植物抗逆工程基因。
　　

2、 茶樹(shù)是一種喜溫暖氣候的木本常綠植物，凍害不但嚴(yán)重影響茶葉的產(chǎn)量和質(zhì)量，同時(shí)也制約著茶樹(shù)的地理分布。我們一直致力于茶樹(shù)抗寒研究，通過(guò)差減雜交分析，我們?cè)诓铇?shù)葉片中鑒定了10個(gè)受低溫誘導(dǎo)的cDNA克隆片段(Cs-CORs)，本研究根據(jù)這些EST序列設(shè)計(jì)序列特異引物，通過(guò)RACE技術(shù)分離了茶樹(shù)CBF類似基因的全長(zhǎng)cDNA序列，GenBank登錄號(hào)為EU563238.1，該序列包含一個(gè)長(zhǎng)780bp的ORF，編碼一個(gè)由259個(gè)氨基酸殘基組成的多

3、肽鏈。氨基酸序列分析表明Cs-CBF含有一個(gè)保守的AP2結(jié)合域，同時(shí)含有兩段CBF特有的多肽序列PKK/RPAGRxKFxETRHP和DSAW。利用Real-timePCR技術(shù)對(duì)Cs-CBF基因進(jìn)行差異表達(dá)研究，結(jié)果表明，室溫條件下，茶樹(shù)葉片中的CBF基因幾乎不表達(dá)，低溫處理后，CBF基因表達(dá)快速升高，2h后開(kāi)始下降，但在36h內(nèi)仍保持較高的水平，說(shuō)明Cs-CBF基因受低溫誘導(dǎo)。洋蔥亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)證明了Cs-CBF基因編碼的蛋白質(zhì)位于細(xì)