脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對兔退變椎間盤的作用的比較的研究.pdf

1、目的：分離、擴(kuò)增并鑒定兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）；
　　 建立鼠腰椎間盤退變的模型；觀察移植的干細(xì)胞能否在退變的椎間盤內(nèi)存活及增殖，探討這兩種間充質(zhì)干細(xì)胞移植對兔退變椎間盤的作用的比較。
　　 方法：①分別采用膠原酶消化法與全骨髓培養(yǎng)法加貼壁法分離純化兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測ADSCs及BMSCs細(xì)胞的表面標(biāo)志，MTT 法檢測ADSCs及BMSCs的生長動(dòng)

2、力學(xué)。②采用髓核抽吸法建立兔椎間盤退變模型。③將BrdU標(biāo)記的ADSCs及BMSCs 移植于退變的兔椎間盤中，在術(shù)后2、4、8周行MRI 檢查后，處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取材，行HE 染色觀察兔退變椎間盤內(nèi)的修復(fù)情況，BrdU免疫組化染色觀察細(xì)胞在退變椎間盤內(nèi)的存活及增殖情況，間苯三酚法檢測蛋白多糖含量的變化情況。
　　 結(jié)果：①兔ADSCs及BMSCs 體外分離純化培養(yǎng)，增殖迅速，短時(shí)間內(nèi)可以獲得足夠的種子細(xì)胞數(shù)量；流式細(xì)胞儀檢測ADS

3、Cs及BMSCs的表面抗原均為CD29 陽性，CD45陰性；MTT 法檢測顯示ADSCs及BMSCs 增殖能力較強(qiáng)，消化傳代后的第3代細(xì)胞經(jīng)過潛伏期、對數(shù)生長期，然后過渡到平臺期。②髓核抽吸法可以成功的建立椎間盤退變的動(dòng)物模型。③術(shù)后2、4和8周，MRI 檢查顯示，3組椎間盤都出現(xiàn)退變表現(xiàn)，椎間隙變窄，T2 加權(quán)相上椎間盤信號變低。但ADSCs 移植組與BMSCs 移植組的椎間盤退變比缺損退變組退變的程度較輕。④移植的ADSCs和BMS

4、Cs在缺損椎間盤中持續(xù)存在，細(xì)胞被5-BrdU標(biāo)記。2周時(shí)陽性細(xì)胞數(shù)量較多，8周后陽性細(xì)胞數(shù)量較少，并且隨著時(shí)間的推移，陽性細(xì)胞由中央?yún)^(qū)域向外周遷移。⑤HE 染色顯示ADSCs及BMSCs在退變椎間盤內(nèi)可以存活和增殖，并能夠保持椎間盤的組織結(jié)構(gòu)。⑥ADSCs 移植組和BMSCs 移植組中的蛋白多糖明顯比缺損退變組的含量多，并且差異有顯著差異（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：①膠原酶消化法和全骨髓培養(yǎng)法可以成功的分離獲取脂肪間充質(zhì)干