銅綠假單胞菌鞭毛運(yùn)動(dòng)相關(guān)基因的功能研究.pdf

1、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一種分布廣泛的條件致病菌,常在臨床上引起頑固性、難治性感染,成為臨床治療的棘手問(wèn)題.鞭毛作為銅綠假單胞菌主要的運(yùn)動(dòng)器官和重要的毒力因子,對(duì)銅綠假單胞菌致病和生物被膜的形成中起著重要作用.該文以一株臨床分離的銅綠假單胞菌PA68做受體菌,應(yīng)用Mu轉(zhuǎn)座復(fù)合物技術(shù)從反向遺傳學(xué)的角度對(duì)鞭毛運(yùn)動(dòng)的相關(guān)基因進(jìn)行研究.該文首次將Mu轉(zhuǎn)座復(fù)合物技術(shù)應(yīng)用到假單胞菌的功能基因組研究,成功優(yōu)化條件

2、將Mu轉(zhuǎn)座復(fù)合物轉(zhuǎn)入到銅綠假單胞菌PA68中,得到3.66 x 10<'4>CFU/μ g DNA的高轉(zhuǎn)化效率,構(gòu)建了菌株P(guān)A68的Mu轉(zhuǎn)座突變文庫(kù).對(duì)Mu轉(zhuǎn)座突變子進(jìn)行泳動(dòng)和蜂群運(yùn)動(dòng)能力的檢測(cè),篩選出鞭毛運(yùn)動(dòng)能力缺陷型突變子6株,經(jīng)過(guò)Southern Blot鑒定、基因克隆、核苷酸測(cè)序研究,鑒定出了轉(zhuǎn)座子插入到基因組中的位置.結(jié)果表明,6個(gè)鞭毛運(yùn)動(dòng)能力缺陷型突變子中,轉(zhuǎn)座子分別插入到5個(gè)基因uvrP、zwf、phzF1、PA0171和

3、PA0413的內(nèi)部.PA0171則屬于功能完全未知的基因.對(duì)基因PA0171進(jìn)行了全序列測(cè)定,同時(shí)利用遺傳重組和遺傳互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究基因PA0171的功能,結(jié)果表明,攜帶PA0171基因的表達(dá)質(zhì)粒pDN-PA0171使突變子PA68PA0171::Mu的泳動(dòng)能力恢復(fù)至正常水平,蜂群運(yùn)動(dòng)能力部分回復(fù);根據(jù)同源重組原理,在銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)AO1中構(gòu)建了基因PA0171突變子.運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)顯示,突變子PAO1PA0171::Gm<'r>