仿生斜交疊層組織工程纖維環(huán)支架的構建及評估.pdf

1、目的：
　　1.采用濕紡法制備取向PCL/SF混合微米纖維膜；
　　2.評估PCL/SF混合微米纖維膜的生物安全性和生物相容性；
　　3.應用兔AF細胞-PCL/SF混合纖維膜復合體構建±30°斜交疊層組織工程纖維環(huán)支架。
　　方法：
　　1.以PCL和SF為原材料，以HFIP為溶劑建立PCL/SF-HFIP共混紡絲液，以濕紡法制備取向 PCL/SF混合微米纖維膜，并通過體視顯微鏡、SEM等觀察纖維膜的表面

2、形態(tài)、纖維直徑及排列方向，通過FTIR分析檢測混合材料化學成分，并分別檢測層間纖維交叉與平行排列時纖維膜的力學性能。
　　2.分離培養(yǎng)兔AF細胞并培養(yǎng)至P2代，CCK-8法檢測混合材料浸提液細胞毒性，將P2代細胞種植到纖維膜上體外培養(yǎng)7天后，通過LIVE/DEAD染色共聚焦圖像及SEM圖像評估混合纖維膜的生物相容性。
　　3.將細胞-混合纖維膜復合體體外培養(yǎng)3天后，構建±30°斜交疊層組織工程纖維環(huán)支架，并通過組織學及免疫組

3、化染色評估細胞-支架復合體的生物學行為及其用于纖維環(huán)組織工程的可行性。
　　結果：
　　1.體視及SEM圖像觀察可見纖維排列方向較為一致，直徑較為均一，纖維表面較粗糙，凹凸不平，混合微米纖維的直徑為18.05±3.51μm；層間纖維角度為±30°交叉排列及平行排列狀態(tài)下拉伸彈性模量分別為9.91±0.63MPa和8.25±1.09 MPa，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；FTIR分析表明混合材料具有PCL和SF的化學成分特

4、征。
　　2. CCK-8增殖檢測顯示隨著時間進行OD值增長趨勢明顯。浸提液組不同時間點之間OD值差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。培養(yǎng)至第10天時與對照組間差異出現(xiàn)統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。LIVE/DEAD染色共聚焦圖像顯示AF細胞與混合纖維膜復合培養(yǎng)后生長活性良好，細胞數(shù)量較多且能夠沿纖維方向取向生長。SEM圖像顯示細胞能夠黏附于材料表面并分泌大量細胞外基質(zhì)。
　　3.斜交疊層組織工程纖維環(huán)固定牢固，截面可見各層間基

5、本無分層，接觸較好。HE染色可見AF細胞呈長梭形，能夠黏附于纖維表面，混合纖維交叉取向結構能夠在圖像中分辨。甲苯胺藍及番紅 O染色為陽性，陽性區(qū)域主要集中在外層及層間的空隙處。I型膠原免疫組化染色為陽性，顯淺棕色，均勻分布在支架纖維之間。
　　結論：
　　1、本實驗中以濕紡法制備了 PCL/SF混合微米纖維膜，其纖維排列方向一致，直徑均勻；將其按±30°斜交疊層排列時具有一定的力學強度。
　　2、取向排列的PCL/SF