MCP-1-CCR2軸參與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢治療心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢到心肌梗死部位的確切機(jī)制尚未完全闡明。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)及其受體CCR2軸在參與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢到心肌梗死部位中的作用，以探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢的可能機(jī)制及提高治療心肌梗死的療效。
　　 方法：1、體外趨化實(shí)驗(yàn)體外培養(yǎng)的第三代MSCs分為未處理的MSCs組，低氧預(yù)處理的MSCs組和兔抗CCR2中和抗體處理的MSCs組。分別將不同處理組的MSCs置于Transwell板

2、的上層，板的下方予以趨化因子MCP-1(200ng/ml)，計(jì)算不同處理組MSCs的趨化能力2、在心梗后不同時(shí)間點(diǎn)(1，3，7，14，28d)不同區(qū)域(梗死中心區(qū)，梗死邊緣區(qū)，正常心肌區(qū))，行免疫組化檢測(cè)MCP-1的含量。3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四組：A為對(duì)照組，心梗后一周經(jīng)冠脈僅注射DMEM；B組為心梗后一周經(jīng)冠脈注射未經(jīng)處理的MSCs；C組為心梗后一周經(jīng)冠脈注射經(jīng)過(guò)低氧預(yù)處理的MSCs；D組為心梗后一周經(jīng)冠脈注射經(jīng)兔抗CCR2中和抗體處理的

3、MSCs。4、應(yīng)用明膠海綿小栓子栓塞豬冠狀動(dòng)脈左前降支第二對(duì)角支遠(yuǎn)端，建立心梗模型。于心梗后一周，將不同處理組的MSCs(1×107/5 mL)經(jīng)心導(dǎo)管注射到LAD栓塞處遠(yuǎn)端。各組以Powerlab+Millar壓力導(dǎo)管、心超檢測(cè)分析心梗前、心梗后、干細(xì)胞移植后四周心功能狀況。干細(xì)胞移植后四周獲取動(dòng)物心臟，病理切片HE染色觀察心肌組織學(xué)變化，Ⅷ因子免疫組化染色計(jì)數(shù)新生血管密度，以及組織中經(jīng)Brdu標(biāo)記的MSCs歸巢數(shù)量。
　　

4、結(jié)果：1、MCP-1對(duì)經(jīng)過(guò)低氧預(yù)處理的MSCs遷移作用最強(qiáng)(P<0.05)，對(duì)未經(jīng)處理的MSCs遷移作用稍弱但有明顯的遷移作用(P<0.05)，而對(duì)經(jīng)過(guò)兔抗CCR2中和抗體處理的MSCs遷移作用明顯減弱，結(jié)果有顯著差異(P<0.05)。2、豬心肌梗死區(qū)域中，MCP-1的含量在梗死中心區(qū)第1d開(kāi)始升高，第3d達(dá)到頂峰，至兩周后降至正常水平，而梗死邊緣區(qū)域第1d開(kāi)始升高，一周后到達(dá)頂峰，以后逐漸下降，四周后恢復(fù)至正常水平。3、梗死后一周行不

5、同類(lèi)型MSCs移植。在移植后四周發(fā)現(xiàn)C經(jīng)低氧預(yù)處理的MSCs組在心功能改善和Ⅶ因子新生血管密度及Brdu標(biāo)記的干細(xì)胞歸巢量比較均優(yōu)于其他各組(P<0.05)。D經(jīng)兔抗CCR2中和抗體處理的MSCs組又較A組改善明顯(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1、MCP-1/CCR2軸參與了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢。2、MCP-1對(duì)經(jīng)過(guò)低氧預(yù)處理的MSCs趨化能力最強(qiáng)，MSCs表面表達(dá)CCR2的受體增加可能為其機(jī)制之一。3、心肌梗死區(qū)表達(dá)MCP-