鎘誘導(dǎo)下活性氧自由基、細胞內(nèi)鈣離子和細胞凋亡三者間的關(guān)系.pdf

1、本文通過正常細胞(HL-7702)和腫瘤細胞(Raji)的體外實驗，研究鎘誘導(dǎo)下活性氧自由基(ROS)堆積，細胞內(nèi)鈣離子變化和細胞凋亡之間的關(guān)系。細胞凋亡水平通過Hoechst33258染色實驗來檢測。細胞內(nèi)鈣離子變化和細胞內(nèi)活性氧自由基堆積分別采用熒光染料Flu-3/AM和DCFH-DA染色后通過流式細胞儀檢測熒光強度來獲得。 在實驗中我們加入了可以專一螯合細胞外鈣離子的EGTA(20mM)和能進入細胞內(nèi)螫合細胞內(nèi)鈣離子的B

2、APTA-AM(10μM)處理細胞，以研究在鎘離子誘導(dǎo)下細胞內(nèi)濃度明顯上升的鈣離子主要來源細胞內(nèi)還是細胞外；通過加入BAPTA-AM(10gM)和可以清除細胞內(nèi)ROS的NAC(15mM)后檢測細胞凋亡率變化，以進一步研究細胞內(nèi)鈣離子和ROS堆積在細胞凋亡途徑中的作用。 本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)HL-7702和Raji細胞在用鎘處理以后細胞凋亡率會明顯上升，在提高了細胞凋亡水平的同時，細胞內(nèi)鈣離子濃度和ROS堆積也明顯增加。當(dāng)細胞內(nèi)鈣離子

3、和ROS被清除以后，細胞凋亡率也顯著下降。BAMTA/AM可以降低了由鎘誘導(dǎo)產(chǎn)生的細胞鈣離子升高(P<0.001)，ROS積累增加(P<0.001)和細胞凋亡水平升高(P<0.001)等效應(yīng)。EGTA可以降低了由鎘離子誘導(dǎo)產(chǎn)生的細胞內(nèi)鈣離子升高(P<0.01)，ROS積累增加(P<0.001)但是不能降低細胞凋亡水平。以上結(jié)果證明了由鎘誘導(dǎo)的細胞內(nèi)鈣離子上升的鈣離子主要來源細胞內(nèi)(HL-7702細胞中約占78％，Raji細胞中約占59％

4、)，另外少部分來源細胞外。實驗結(jié)果同時顯示，在鎘離子的誘導(dǎo)下細胞凋亡和ROS堆積(HL-7702細胞中r=0.8781；Raji細胞中r=0.6919)和細胞內(nèi)鈣離子濃度上升(HL-7702細胞中r=0.9073；Raji細胞中r=0.8692)均呈顯著正相關(guān)。而ROS堆積和細胞內(nèi)鈣離子濃度上升也呈顯著jF相關(guān)(HI-7702細胞中r=0.8619；Raji細胞中r=0.9061)。 通過本實驗我們可以得出兩個結(jié)論：1)在鎘離