線粒體基因體8272位點MSI與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險及發(fā)病年齡的相關(guān)研究.pdf

1、目的:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，也是導(dǎo)致女性死亡的重要腫瘤疾病之一。乳腺癌是一種有多種基因共同參與，多條因素共同影響，不斷累積形成的疾病，有明顯的家族遺傳性。因其沒蛋白的保護(hù)，處于高氧自由基環(huán)境中，而且它缺少有效修復(fù)系統(tǒng)，極易發(fā)生突變。近年研究發(fā)現(xiàn)線粒體基因的結(jié)構(gòu)變異在腫瘤形成過程中經(jīng)常發(fā)生。微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatelliteinstability, MSI)是指腫瘤組織和相應(yīng)的正常組織對比，等位基因的拷貝數(shù)發(fā)生改變，

2、也就是微衛(wèi)星重復(fù)串聯(lián)序列次數(shù)發(fā)生改變。近年來，研究人員在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)了線粒體DNA微衛(wèi)星不穩(wěn)定性的現(xiàn)象，如在食管癌、腎癌等腫瘤中均發(fā)現(xiàn)的8272位點9bp缺失現(xiàn)象。本研究通過對家族性乳腺癌患者、一級健康女性親屬、散發(fā)性乳腺癌患者及正常人群的外周血中線粒體基因中易發(fā)生MSI的8272區(qū)域進(jìn)行測序及分析，探索線粒體基因微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險及發(fā)病年齡關(guān)系。為更好了解乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及家族性乳腺癌的基因診療提供新思路。
　　

3、方法:
　　1、實驗對象
　　均為女性，無既往其他惡性腫瘤病史。研究對象分為四組:(1)散發(fā)性乳腺癌患者52例，(2)家族性乳腺癌患者50例，(3)一級女性親屬46例，(4)正常女性作為對照組，為44例。乳腺癌患者均選自就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心并經(jīng)過病理學(xué)確的患者;一級女性親屬選自家族性乳腺癌家系，無乳腺相關(guān)疾病;對照組選自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院體檢中心正常體檢、年齡相當(dāng)?shù)慕】蹬?，獲得研究對象知情同意之后，采取其外

4、周靜脈血5ml，并記錄各組臨床病理資料。
　　2、實驗過程
　　用純化試劑盒提DNA，定量檢測DNA產(chǎn)物是否合格，以5'-ACCACTTTCACCGCTACACG-3',5'-TTTAGTTGGGGCATTTCACTG-3'為上下游引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增包括8272位點的線粒體DNA片段，后將PCR產(chǎn)物以電泳證實后送測序公司測序。
　　3、統(tǒng)計分析
　　采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，以x2檢驗(Pearso

5、n Chi-Square test)對散發(fā)乳腺癌患者及家族性乳腺癌患者臨床類型的差異以及各實驗組mtMSI分布頻率進(jìn)行兩兩比較，單因素分析采用Kaplan-Meier方法及Log-Rank方法，以上P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義，0.05＜P＜0.1定義為邊界差異，可能具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、對8154-8380線粒體基因片段測序分析發(fā)現(xiàn)共有13個MSI位點，變異率約為5.7％，其中發(fā)生MSI的樣本例數(shù)超過樣本總量的

6、5％為高頻位點。在192個實驗樣本中19例發(fā)生了8272位點9-bp缺失，約占樣本總量的9.9％，屬于高頻位點。
　　2、以x2檢驗(Pearson Chi-Square test)對四個實驗組中8272位點9-bp缺失分布頻率兩兩比較，P值均大于0.05，提示82729-bp的缺失與乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。
　　3、單因素分析采用Kaplan-Meier繪制發(fā)病年齡曲線。用Log-Rank方法分析8272位點MSI與家族性乳

7、腺癌及散發(fā)性乳腺癌發(fā)病年齡關(guān)系:8272位點9-bp缺失與家族性乳腺癌的發(fā)病年齡無關(guān)（P=0.876），8272位點9-bp缺失與散發(fā)性乳腺癌的發(fā)病年齡(P=0.090)為邊界線差異，提示可能與乳腺癌的發(fā)病年齡有關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、8154-8380線粒體基因片段中8272位點為發(fā)生MSI的高頻位點
　　2、82729-bp缺失變異情況與散發(fā)乳腺癌及家族性乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)。
　　3、82729-bp缺失