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簡介：國家自然科學基金研究方案撰寫技巧成都中醫(yī)藥大學丁維俊201311NSFC項目申請書內(nèi)容簡表、摘要立項依據(jù)研究方案研究條件與基礎(chǔ)經(jīng)費預(yù)算NSFC研究方案330分1研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（80分）范圍合適35個內(nèi)容N重點突出12個重點關(guān)鍵問題選擇準確2技術(shù)路線（90分）設(shè)計合理方法可行成熟可靠可重復(fù)性強3研究方法及手段（90分）方法先進技術(shù)成熟可靠有創(chuàng)新4研究的預(yù)期目標（70分）可以達到，留有余地。發(fā)表論文申請專利可應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)摘要的主要內(nèi)容是研究方案如“用方法進行研究，探索證明問題，對闡明機制／揭示規(guī)律有重要意義，為奠定基礎(chǔ)／提供思路”立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系立論依據(jù)闡述背景和理由，回答“為什么”研究方案是申請書的核心，回答“怎么做”研究基礎(chǔ)展示積累和實力，建立“信任感”研究方案研究目標、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題研究方法、技術(shù)路線年度研究計劃及預(yù)期進展1研究目標撰寫要求有限目標，與研究內(nèi)容相呼應(yīng)如探索問題，明確關(guān)系，揭示規(guī)律，闡明原理（機制），建立方法等【研究目標】篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機理，為防治白內(nèi)障提供線索。研究目標1個目標解決科學問題和學術(shù)性問題關(guān)鍵問題1－2個，并與目標一致問題目標“大、平、淺”沒有做到“專、精、深”應(yīng)提倡“小題大做”2、研究內(nèi)容存在問題內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標。撰寫要求內(nèi)容要適當，確保研究周期內(nèi)完成；與目標相輔相成，為研究目標服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。研究內(nèi)容相對集中的有限目標和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點和特色。深入的文獻調(diào)研凝煉出的科學問題是什么采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個科學問題解決這個科學問題對學術(shù)界和臨床有什么意義對社會經(jīng)濟的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價值3研究方法（1）病例納入與排除方法（2）（臨床）檢測指標與標本采集（2）基本研究方法（3）特殊研究方法（4）統(tǒng)計學處理材料或研究對象模型與目標及內(nèi)容相吻合；材料可靠，對象可控制；自擬處方要論證。分組方案設(shè)計和樣本量要符合統(tǒng)計學要求，對照要嚴格。方法在保證準確、可靠的前提下，盡可能要有創(chuàng)新。指標針對性強是第一位。盡量采用最新的專一性強的指標并要論證其可行性和適用性。介紹技術(shù)方法的技巧成熟的方法要簡要介紹，重點闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù)新方法要詳細介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。注意必須對所運用的技術(shù)方法原理、流程及在實際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。研究方法常見問題過于簡單在實驗方案中只有方法名稱而無具體步驟。過于繁雜大量羅列一些常規(guī)的實驗方法。撰寫要求以研究項目的需求為前提，盡量采用目前最先進的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當中。4、擬解決的關(guān)鍵問題什么是關(guān)鍵問題研究過程中對達預(yù)期目標有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素。為達預(yù)期目標所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。撰寫要求找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。技術(shù)路線路線圖，簡單明了5、技術(shù)路線存在問題不清楚，不詳細，不可行。撰寫要求清晰、詳細、注意邏輯性。撰寫方法以時間順序為主線設(shè)計技術(shù)路線以研究內(nèi)容為主線設(shè)計技術(shù)路線分大小標題，突出邏輯關(guān)系。詳細地寫清楚每個具體步驟。研究目標、研究內(nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及其關(guān)系1、首先要確定研究目標國內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的具體科學問題就是項目的研究目標2、依據(jù)目標確定研究內(nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法3、研究內(nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別研究內(nèi)容重點回答觀察什么指標、階段目標。技術(shù)路線重點回答怎么做的操作流程。6、可行性分析理論分析學術(shù)可行性研究手段、方法分析技術(shù)可行性預(yù)實驗結(jié)果分析前期基礎(chǔ)對所具備的實驗條件進行分析對項目組成員搭配及其運用技術(shù)方法的能力分析7、創(chuàng)新性對創(chuàng)新的理解創(chuàng)新性與先進性是有根本區(qū)別的。原始創(chuàng)新填補空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。跟蹤創(chuàng)新在前人工作基礎(chǔ)上補充、完善現(xiàn)有理論；對原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。8、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果年度研究計劃按年度列出研究內(nèi)容及其階段目標；擬組織的重要學術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等。預(yù)期研究結(jié)果理論成果建立豐富補充填補技術(shù)方法建立完善專利可望獲得論文國際、國內(nèi)人才培養(yǎng)青年科技骨干、博碩研究生研究方案寫作要點條理清楚邏輯性目標明確重要性論據(jù)充分科學性方法可行可行性基礎(chǔ)良好優(yōu)越性案例分享題目溫腎健脾針法對脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機理【摘要】腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針藥均有肯定療效，但缺乏諸如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素LEPTININSULINCHOLECYSTOKININ及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導(dǎo)致機體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機制。以溫腎健脾針法治療至肥胖癥狀及BMI指標明顯改善；采用前述方法檢測療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針法對腸道菌群及其脂代謝的動態(tài)調(diào)控模式。本項目可望揭示脾腎兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異常亢進的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針法的全新治療機理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學科攻克肥胖作出奠基性貢獻。研究意義腸道菌群與機體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含有促進能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征針刺減肥作用機理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三（1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開啟針刺減肥研究新領(lǐng)域；（2）建立溫腎健脾針法經(jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學說；（3）構(gòu)建針藥減肥與腸道菌群研究新平臺，促進肥胖機理研究與藥物研發(fā)。研究目標揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針法通過調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機制，建立證候與腸道菌群研究平臺。21研究內(nèi)容基于上述目標，本項目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究221篩查促進脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對脂肪代謝起促進、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動菌種鑒定儀進一步鑒定到種。這三方面代表性細菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。222分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。223檢測單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。224測試肥胖相關(guān)激素LEPTININSULINCHOLECYSTOKININ與FIAF酶含量。225體外試驗該核心菌群的能量收獲效率。226整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機理。23擬解決的關(guān)鍵問題宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個體的腸道菌群。如何排除眾多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂肪代謝的腸道核心菌群，是本項目擬解決的關(guān)鍵問題。本項目擬采取下述四種方法，針對性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問題（1）嚴格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標準，病證結(jié)合納入病例。（2）巧妙設(shè)計對照。（3）強化檢測指標的互補性、相互驗證性。（4）設(shè)計體外驗證實驗。圖2實驗技術(shù)路線流程簡圖32研究方法和技術(shù)要點簡述321典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標準為保障試驗結(jié)果具有統(tǒng)計意義，同時考慮不超過20的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過培訓的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學專家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配的健康對照。3212治療方法脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因為臨床顯著的個體差異，本項目僅在此提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則腧穴選擇主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。針法選擇選用溫針或溫補法為主。操作方法在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時間選擇在飯后1小時后進行。322實驗方法簡介3221核心菌群的篩查采用選擇性培養(yǎng)基，從待測大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等2007）雙歧桿菌屬BS培養(yǎng)基但用申請者改進的以新鮮番茄汁代替多種維生素。乳桿菌屬LBS培養(yǎng)基按標準配方自制。類桿菌屬KV培養(yǎng)基將購自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基NO98404滅菌后冷卻至55℃，加入兔血5％、卡那霉素100GM1、硫酸鏈霉素5GM1及VK101％，傾注平皿。柔嫩梭菌屬MRS培養(yǎng)基MSMITHII菌MBC培養(yǎng)基（補充3GLFMATE3GLACETATE0006NA2S；BTHETAIOTAOMICRON菌SHAEDLER培養(yǎng)基；均按MARTIN等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實驗時，用無菌稱量紙取糞便01G放入09ML稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無菌稀釋管作對數(shù)稀釋至108。依據(jù)申請者前期研究經(jīng)驗及相關(guān)文獻報道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20ΜL滴于培養(yǎng)基表面。每個稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個稀釋度。然后迅速置于DYII型厭氧培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)48H。計數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即得到每克糞便標本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS30統(tǒng)計軟件包，用T檢驗分析不同組別的統(tǒng)計學差異顯著性。3222UPLC–MS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜擬使用由四川大學華西醫(yī)學研究中心開放實驗室提供的WATERS公司ACQUITYUPLC檢測系統(tǒng)，參照MARTIN等2007建立的方法，完成大便檢測。標準品由SIGMA公司購買。質(zhì)譜檢測在WATERS公司產(chǎn)品TOFLCTPREMIERWATERSMSTECHNOLOGIESMANCHESTERUK完成。其操作過程如下。取低溫保存的大便浸出液，用11甲基氰水混合液調(diào)整濃度至1MGML，上ACQUITYBEHC1817M柱，以500ULMIN流速洗脫12MIN，洗脫液組成由甲基氰水4060比例逐漸調(diào)整為6040PH40。將分批收集的洗脫樣品上QTOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸－腦啡肽為參照，采用WOPTIC通路、毛細管電壓26KV、錐體電壓50V、噴霧氣流600ULH等條件，完成檢測。每個樣品重復(fù)掃描10次，得其平均值。3228核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗采用KIHARA等2002建立的微量培養(yǎng)法，檢測待測樣本對大豆寡聚糖SOYBEANOLIGOSACCHRIDE乳果糖LACTULOSE棉子糖RAFFINOSE蔗果三糖KESTOSE等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20GL），按05ML孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測大便樣本作102103104105稀釋，然后接種于培養(yǎng)板每個濃度梯度設(shè)置3個重復(fù)樣。放入細菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6H后，應(yīng)用前述“酶重量法”測定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GC–FID法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計），從而確認腸道菌群樣本的能量收獲與脂代謝功能。323可行性分析3231學術(shù)依據(jù)充分、實驗方案合理，是本項目得以實現(xiàn)的理論基礎(chǔ)3232前期相關(guān)實驗與臨床經(jīng)驗，是本項目順利實施得基本保障3233人員搭配合理、技術(shù)熟練，具備完成本項目的知識與人力資源3234實驗設(shè)備基本具備，缺少的設(shè)備也得到落實4本項目的特色與創(chuàng)新之處41首次提出針灸減肥機理中，應(yīng)包括調(diào)節(jié)腸道菌群之新假說。提出在針灸減肥的整體性調(diào)控機理中，尚應(yīng)包括腸道菌群之局部調(diào)節(jié)。結(jié)合申請人研究經(jīng)歷與學科發(fā)展態(tài)勢看，該假說是對傳統(tǒng)針刺減肥原理的重要補充善，值得深入研究。42研究方法的組合創(chuàng)新43多學科整合效應(yīng)明顯，突出中醫(yī)自身的特色與優(yōu)勢5年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果2009年度納入患者與健康對照各20例，完成研究內(nèi)容之14項；總結(jié)并優(yōu)化研究方案，撰寫研究論文12篇。2010年度納入患者與健康對照各30例，完成研究內(nèi)容之14項；撰寫論文24篇發(fā)表論文34篇；培養(yǎng)青年科技骨干2名。2011年度完成研究內(nèi)容之5、6項研究。發(fā)表SCI論文2３篇。項目結(jié)題。培養(yǎng)研究生2名。預(yù)期研究結(jié)果理論成果填補針灸調(diào)控腸道菌群的研究空白。技術(shù)平臺完善中醫(yī)藥候與腸道菌群研究平臺。論文國際SCI論文23篇、國內(nèi)35篇。人才培養(yǎng)擬培養(yǎng)青年科技骨干2名、碩士研究生2名。祝各位申報成功

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